2013 Fiscal Year Annual Research Report
単純ヘルペスウイルスと宿主細胞間の分子攻防の網羅的解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Molecular basis of host cell competency in virus infection |
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| Project/Area Number |
25115506
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
加藤 哲久 東京大学, 医科学研究所, 助教 (40581187)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 単純ヘルペスウイルス / インターラクトーム / リン酸化プロテオーム |
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| Research Abstract |
本研究は、高感度質量解析計を駆使し、単純ヘルペスウイルス(HSV)感染細胞におけるウイルス因子と宿主因子の相互作用がもたらす宿主細胞制御機構およびウイルス病態発現機構を解明することを目標としている。今期は、(i) インターラクトーム解析により明らかとなったウイルス因子ICP22と宿主転写因子p53の相互作用のHSV増殖における役割の解明および (ii) 定量的リン酸化プロテオーム解析によるウイルスPKの宿主細胞基質の網羅的探索を試みた。
(i)の解析の結果、p53はHSV-1の最初期必須遺伝子の一つであるICP27の効率的な発現に必要であるという正の影響に加え、他の病態発現関連ウイルス遺伝子であるICP0の不安定化という負の影響を併せ持ち、本研究において、p53の相互作用因子であることが明らかとされたICP22が後者の負の作用のみを中和することで、HSV-1はp53の正の影響のみを享受していることが示唆された。本結果は、国際学術誌であるJ Virol. 87:9323-32(2013)に掲載された。
(ii)の解析の結果、Sorting Nexin 3(SNX3)が、HSV-1ウイルスPKの標的基質であることが明らかとなった。また、SNX3発現抑制細胞を用いた解析より、SNX3は、HSV-1ウイルスPK活性依存的に、HSV-1の増殖を司ることも明らかとなった。本結果は、第38回 国際ヘルペスウイルスワークショップ サテライトミーティングおよび第61回日本ウイルス学会学術集会にて、口頭発表演題に採択された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究実績の概要に記載した通り、本研究は一定の成果(学術論文、学会発表等)を得ていること、高感度質量解析計を駆使したウイルス因子と宿主因子の相互作用に関する網羅的なスクリーニングも順次、進展していることから、おおむね順調に進展していると考えられる。
インタラクトーム解析では、従来は可溶化試薬の悪影響により解析が困難であったウイルスタンパク質に関しても、Filter Aided Sample Prep (FASP)法を導入することで、むしろより高感度な解析が可能となった点など当初の計画以上に進展した点もあった。一方、リン酸化プロテオーム解析では、SNX3以外の有力な宿主細胞基質の候補分子の同定には至っておらず、さらなる解析が必要である。
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| Strategy for Future Research Activity |
(今後の研究の推進方策)
インターラクトーム解析に関しては、申請時の計画通り、以下の(i)~(iv)を推進する。
(i) ウイルス増殖に重要なウイルス因子より順次、ウイルス因子と宿主因子の複合体を精製し、高感度質量分析計により相互作用因子を包括的に同定する。(ii) (i)により得られた知見を、データベース化する。(iii) Pull down法により、宿主因子とウイルス因子の相互作用に、必要な最小アミノ酸を同定する。(iv) (iii)で同定したアミノ酸特異的組換えウイルスをBACシステムにより作製し、マウス病態モデルに供し、病態発現への関与を解析する。
定量的リン酸化プロテオームに関しては、ウイルスPKが司る宿主細胞改変機構の内、主要なものの一つと考えられるSNX3を介した細胞内輸送の攪乱に関して、より詳細な解析を試みる。
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[Journal Article] Long noncoding RNA NEAT1-dependent SFPQ relocation from promoter region to paraspeckle mediates IL8 expression upon immune stimuli.2014
Author(s)
K. Imamura, N. Imamachi, G. Akizuki, M. Kumakura, A. Kawaguchi, K. Nagata, A. Kato, Y. Kawaguchi, H. Sato, M. Yoneda, C. Kai, T. Yada, Y. Suzuki, T. Yamada, T. Ozawa, K. Kaneki, T. Inoue, M. Kobayashi, T. Kodama, Y. Wada, K. Sekimizu, N. Akimitsu.
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Journal Title
Molecular Cell
Volume: 53
Pages: 393-406
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Us3 kinase encoded by herpes simplex virus 1 mediates downregulation of cell surface major histocompatibility complex class I and evasion of CD8+ T cells.2013
Author(s)
T. Imai, N. Koyanagi, R. Ogawa, K. Shindo, T. Suenaga, A. Sato, J. Arii, A. Kato, H. Kiyono, H. Arase, and Y. Kawaguchi.
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Journal Title
PLoS One.
Volume: 8
Pages: e72050.
DOI
Peer Reviewed
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