2014 Fiscal Year Annual Research Report
ヒストンメチル化酵素複合体の構造解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Structural basis of cell-signalling complexes mediating signal perception, transduction and responses |
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| Project/Area Number |
25121740
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
仙石 徹 独立行政法人理化学研究所, 横山構造生物学研究室, 研究員 (60576312)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | エピジェネティクス / X線結晶構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2）はヒストンH3 Lys27のトリメチル化（H3K27me3)を触媒するタンパク質複合体であり、標的遺伝子の発現を抑制することにより他細胞生物の分化と癌化において重要な役割を果たす。本研究では、PRC2の構造機能解析を目的として研究を行った。HEK293細胞においてPRC2のコアサブユニット4種類を共発現させ、アフィニティークロマトグラフィーとゲルろ過クロマトグラフィーにより4者複合体の調製に成功した。この手法は、これまでに報告されていた昆虫細胞を利用する方法より収量が良く、構造解析のための資料調製として適した方法と考えられる。さらに、付加サブユニットAEBP2を大腸菌で単独発現・精製し、上記の4者複合体と混合してさらに精製することにより、5者複合体の調製に成功した。これらの複合体について、結晶化スクリーニングと低温電子顕微鏡による構造解析のための条件検討を行っている。
MLL1複合体はヒストンH3 Lys4をメチル化するタンパク質複合体であり、標的遺伝子の発現を正に制御している。MLL1複合体によるクロマチンのメチル化には、Bre1複合体によるヒストンH2Bのユビキチン化が必要である。このヒストン修飾のクロストークの構造的基盤を得るため、MLL1複合体とBre1複合体の再構成を行った。MLL1複合体の5種類のコアサブユニットを別々に大腸菌で発現させ、菌体を混合しアフィニティークロマトグラフィーとゲルろ過クロマトグラフィーにより5者複合体の調製に成功した。また、Bre1AとBre1Bを昆虫細胞で共発現させ、アフィニティークロマトグラフィーとゲルろ過クロマトグラフィーにより2者複合体の調製に成功した。これらについて、結晶化スクリーニングが進行中である。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(2 results)
