2014 Fiscal Year Annual Research Report
クロトーの、グルクロン酸糖鎖およびＦＧＦ２３との複合体としての構造解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Structural basis of cell-signalling complexes mediating signal perception, transduction and responses |
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| Project/Area Number |
25121747
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| Research Institution | Foundation for Biomedical Research and Innovation |
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Principal Investigator |
前田 良太 公益財団法人先端医療振興財団, その他部局等, 研究員 (50432399)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | Ｘ線結晶構造解析 / ホルモン受容体 / 代謝性疾患 / シグナル複合体 / ビタミンＤ合成酵素 / 副甲状腺ホルモン / 腎機能 / 骨粗しょう症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
リン酸、カルシウムイオン濃度の代謝を制御するアルファークロトーが、タンパク質としてどのようにして機能しているのかを構造学的手法に基づきに解析してきた。本研究課題では、アルファークロトーが糖分解酵素様のドメインを２つタンデムに持つことに注目し、それぞれのドメインの共通点と異なる点から、各ドメインの生理機能を構造学的見地から理解する。
タンパク質の発現系として、ほ乳類培養細胞を用いた。具体的にはHeLa細胞、HEK293細胞、そして糖鎖修飾が限定されるHEK293(GnT1-)細胞の３種類である。また、発現させるアルファークロトーの動物種として、ヒト、マウス、ラット、そしてニワトリの４種類を採用した。それぞれのタンパク質を、発現する発現細胞株を作製し、各々（ヒト、マウス、ラット、およびニワトリのアルファークロトータンパク質）を精製し、結晶化スクリーニングを行った。
ヒトのアルファークロトータンパク質の結晶は、針状に成育し、結晶最適化の結果、約20 x 20 x 500マイクロメートルからなる結晶が得られた。しかしながら、この結晶から得られるＸ線回折データは、異方性を示し、その後の構造解析を行うことができなかった。
マウスとラットのアルファークロトータンパク質の結晶は、より細い針状の結晶に成育した。約2 x 2 x 300マイクロメートル以下からなる針状の結晶だったため、Ｘ線回折実験には用いることができなかった。
ニワトリのアルファークロトータンパク質の結晶は、塊状に成育した。結晶最適化の結果、約20 x 20 x 20マイクロメートルからなる正六面体の結晶が得られた。これらの結晶を用いてＸ線回折データを取得することができた。解析した結果、2.3オングストローム分解能での回折データを得ることができた。グリコシダーゼの構造を鋳型にした分子置換解析から、位相の解を求めることができた。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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