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2015 Fiscal Year Annual Research Report

F1-ATPaseによるエネルギー変換と非平衡揺らぎ

Publicly Offered Research

Project AreaSynergy of Fluctuation and Structure:Foundation of Universal Laws in Nonequilibrium Systems
Project/Area Number 26103528
Research InstitutionChuo University

Principal Investigator

宗行 英朗  中央大学, 理工学部, 教授 (80219865)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2016-03-31
Keywords生体エネルギー変換 / 分子モーター / ゆらぎ / F1-ATPase
Outline of Annual Research Achievements

2015年度は,長時間安定したピントを維持して観察を行うための顕微鏡システムの開発を行った.今のところ10分前後の連続した観察を安定して行えており,十分な性能を持つものが出来たと考えている.
一方,ATPase活性が落ちた変異体でどのように回転の性質が変わるかを検討すれば,化学反応と力学的な動きの共役に関する知見が得られることを期待してβE190D変異体の回転について,外部トルク依存性などを調べた.
βE190D変異体は,加水分解反応に重要なグルタミン酸(E)をアスパラギン酸(D)に置換することにより触媒活性が1/100に低下したもので,F1-ATPaseの変異体の中では最もよく調べられたものの一つである.しかし,この変異体に外部トルクをかけると大きくばらついたストールトルクが得られ,それらはすべてATPの加水分解の自由エネルギー差から期待されるものより低くなっていた.以上の結果は,E190D変異が加水分解反応に影響するだけでなく,モーターの機械的な安定性を低下させ,回転にスリップが起こったことを示唆している.実際に熱処理を行って野生型と比較したところ,74℃で安定性が明らかに低下しており,また,γサブユニットのないα3β3複合体の安定性をゲル濾過で調べたところ,βE190D変異はα3β3複合体を安定に形成できないことが分かった.図らずも,ATPase活性の低下した変異体の回転への影響が,分子全体の機械的な強度の不安定化という形で現れたのであるが,F1-ATPaseがβサブユニットでのATP加水分解活性とγサブユニットの回転をカップルすることを考えると,加水分解活性に重要なアミノ酸残基が機械的な動きに関してもそれを支える形で重要な役割を果たすのは合理的なのかも知れない.
このほかに光駆動型プロトンポンプであるプロテオロドプシンのポンプ活性の研究をおこない,pHによって輸送方向の逆転が起こることを示唆する結果を得た.

Research Progress Status

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

27年度が最終年度であるため、記入しない。

  • Research Products

    (8 results)

All 2016 2015

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] Formation of M-Like Intermediates in Proteorhodopsin in Alkali Solutions (pH ≧~8.5) Where the Proton Release Occurs First in Contrast to the Sequence at Lower pH2016

    • Author(s)
      Jun Tamogami, Keitaro Sato, Sukuna Kurokawa, Takumi Yamada, Toshifumi Nara, Makoto Demura, Seiji Miyauchi, Takashi Kikukawa, Eiro Muneyuki, Naoki Kamo
    • Journal Title

      Biochemistry

      Volume: 55 Pages: 1036-1048

    • DOI

      10.1021/acs.biochem.5b01196

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] F1-ATPaseのP-loop変異体TF1(βG158A)のリン酸解離角度の解明2016

    • Author(s)
      成田宏夏,星名仁志,吉田光,中山洋平,鳥谷部祥一,上野博史,宗行英朗
    • Organizer
      生体運動研究合同班会議 2016
    • Place of Presentation
      キャンパスプラザ京都
    • Year and Date
      2016-01-08 – 2016-01-12
  • [Presentation] 好熱菌F1のβE190残基は構造を安定化することにより,F1の高効率エネルギー変換に貢献する2016

    • Author(s)
      田中真奈,河上知広,中山洋平,鳥谷部祥一,上野博史,工藤成史,宗行英朗
    • Organizer
      生体運動研究合同班会議 2016
    • Place of Presentation
      キャンパスプラザ京都
    • Year and Date
      2016-01-08 – 2016-01-10
  • [Presentation] TF1bE190 residue contributes to high energy transduction efficiency by stabilizing the structure of the enzyme.2015

    • Author(s)
      田中 真奈, 河上 知広, 中山 洋平, 鳥谷部 祥一, 上野 博史, 工藤 正史, 宗行 英朗
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学角間キャンパス(石川)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
  • [Presentation] The relationship between F1-ATPase P-loop mutant TF1(βG158A) and Pi release2015

    • Author(s)
      成田 宏夏, 星名 仁志, 吉田 光, 伊藤 亜由美, 伊藤 丈太郎, 中山 洋平, 鳥谷部 祥一, 上野 博史, 宗行 英朗
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学角間キャンパス(石川)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
  • [Presentation] pH dependence of the photoinduced proton transfer in proteorhodopsin under alkaline conditions2015

    • Author(s)
      田母神 淳, 佐藤 慶太郎, 黒川 少名, 山田 匠, 奈良 敏文, 出村 誠, 菊川 峰志, 宗行 英朗, 加茂 直樹
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学角間キャンパス(石川)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
  • [Presentation] Rotation of β E190D Mutant of F1-ATPase2015

    • Author(s)
      E. Muneyuki, M. Tanaka, T. Kawakami, H. Ueno, Y. Nakayama, S. Toyabe
    • Organizer
      International Symposium on Fluctuation and Structure out of Equilibrium 2015
    • Place of Presentation
      Inamori Hall, Shiran-Kaikan, Kyoto University
    • Year and Date
      2015-08-23 – 2015-08-25
  • [Presentation] 回転分子モーターF1-ATPaseの機能解析2015

    • Author(s)
      宗行 英朗
    • Organizer
      新学術領域「ゆらぎと構造」+「分子ロボティクス」合同研究会
    • Place of Presentation
      東京大学本郷キャンパス理学部1号館小柴ホール
    • Year and Date
      2015-06-27 – 2015-06-27

URL: 

Published: 2017-01-06  

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