2015 Fiscal Year Annual Research Report

PV陽性GABA細胞－グリアtripartite synapse細胞外糖鎖の役割

Publicly Offered Research

Project Area	Deciphering sugar chain-based signals regulating integrative neuronal functions
Project/Area Number	26110705
Research Institution	Hamamatsu University School of Medicine
Principal Investigator	福田敦夫浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)
Project Period (FY)	2014-04-01 – 2016-03-31
Keywords	細胞外糖鎖 / GABA / グリア / ペリニューラルネット / 塩素イオン / バルブアルブミン / GAD67 / 母体ストレス
Outline of Annual Research Achievements	１．PV陽性GABA細胞と細胞外糖鎖が選択的に脱落したモデルの行動解析：GAD67ヘテロ欠損胎仔の母体に拘束ストレスをかけると、生後にPV陽性GABA細胞とperineuronal nets（PNN）が内側前頭皮質で減少した。生後8週齢雄での行動評価では、衝動性と注意機能に有意は無く、場所学習と逆転学習、作業記憶にも有意差は無かったが、胎生ストレス群で場所学習記憶の保持が低下していた。２．PV陽性GABA細胞選択的脱落モデルの細胞外糖鎖の種類と局在の解析：上記モデルの脳切片を作製し、抗PV抗体、biotinylated Wisteria floribunda agglutinin (WFA)（PV細胞の一部のPNNを認識）と抗アグリカン抗体（PNN全般を認識）を用い、PV陽性／陰性細胞各々のPNNを解析したところ、PV陽性細胞の脱落に伴い有意にWFAとアグリカンが減少したが、脱落のないPV陰性細胞では両者とも変化なかった。また、WFAやアグリカンの染色強度も解析したが変化なく、PNNの減少は糖鎖形成の障害ではなく、PV陽性細胞の脱落による基質の減少に起因すると結論した。３．細胞外糖鎖脱落したモデルの電気生理学的解析：マウス脳スライスを人工脳脊髄液中で生保持し、chondroitinase ABC （0.1 unit/mL）で1時間還流してPNNを除去することに成功した。これで今後PV-GFP共発現マウスでPV陽性GABA細胞やシナプスの電気生理学的解析を行えるようになった。４．PV陽性GABA細胞と細胞外糖鎖が選択的に脱落したモデルの網羅的DNAメチル化解析：１．のモデル脳組織の網羅的DNAメチル化解析をRRBS法で行った。多くの遺伝子のメチル化異常があったが、GABA細胞の発生・移動と糖鎖との関連から、Dlx2, Fktn, Ephb3, Otx2, Nkx6-2、Cdk5r2などと、その関連蛋白質の発現を胎仔脳で調べることとした。
Research Progress Status	27年度が最終年度であるため、記入しない。
Strategy for Future Research Activity	27年度が最終年度であるため、記入しない。