2015 Fiscal Year Annual Research Report
ジストログリカン糖鎖を形成する酵素複合体の同定とその作動メカニズムの解明
Publicly Offered Research
Project Area | Deciphering sugar chain-based signals regulating integrative neuronal functions |
Project/Area Number |
26110716
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Research Institution | Nagoya City University |
Principal Investigator |
矢木 宏和 名古屋市立大学, 薬学研究科(研究院), 講師 (70565423)
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Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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Keywords | 筋ジストロフィー / ラミニン結合性糖鎖 / 酵素複合体 |
Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までに筋ジストロフィーの原因遺伝子産物(TMEM5、FKTN、FKRP、POMK、ISPD)のノックアウト細胞を樹立した。本年度は、これらノックアウト細胞にαジストログリカンを発現させ、質量分析により、リコンビナントタンパク質上の糖鎖の構造解析を行った。その結果、本糖鎖の還元末端構造であるリン酸化3糖構造(Man-(phospate)-GlcNAc-GalNAc)の先に、リビトールリン酸が2つタンデムに結合し、その還元末端にさらにキシロースとグルクロン酸が結合した配列を見出すことができた。ISPD、FKTNおよびTMRM5のノックアウト細胞にはリン酸化3糖構造先にリビトールリン酸の付加がおきていないことから、第一番目のリビトールリン酸の付加に関与していることが考えられる。またFKRPのノックアウト細胞にはリビトールリン酸1残基の付加が認められたことら、FKRPは2つ目のリビトール付加を担っていることが予想される。こうした結果は、ごく最近報告された論文(Kanagawa et al. Cell Reports 14, 2209–2223)の結果と一致するものであった。 その一方で、プルダウンアッセイにより、FKTN、FKRP、TMEM5が3者複合体を形成していること、TMEM5がLARGEと相互作用していることを明らかとした。先行研究により、LARGEとB4GAT1が相互作用していることが報告されていることから、ゴルジに存在する原因遺伝子産物は、大きな複合体を形成していることが考えられる。このような、ラミニン結合性糖鎖の生合成に関わる酵素群が複合体を形成し、複雑なラミニン結合性糖鎖の生合成過程を担っているものと予想される。
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Research Progress Status |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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Strategy for Future Research Activity |
27年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Stable isotope labeling of glycoprotein expressed in silkworms using immunoglobulin G as a test molecule2015
Author(s)
Hirokazu Yagi, Masatoshi Nakamura, Jun Yokoyama, Ying Zhang, Takumi Yamaguchi, Sachiko Kondo, Jun Kobayashi, Tatsuya Kato, Enoch Y. Park, Shiori Nakazawa, Noritakga Hashii, Nana Kawasaki, and Koichi Kato
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Journal Title
J. Biomol. NMR
Volume: 62
Pages: 157-167
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] 細胞外O-GlcNAcの修飾に関わるEOGT変異マウスの表現形解析2015
Author(s)
Shogo Sawaguchi, Mitsutaka Ogawa, Hirokazu Yagi, Koichi Kato, Jiro Usukura, Koichi Furukawa, and Tetsuya Okajima
Organizer
糖鎖科学中部拠点第12回「若手の力」フォーラム
Place of Presentation
名城大学薬学部(名古屋)
Year and Date
2015-11-28
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