2014 Fiscal Year Annual Research Report
哺乳類生殖細胞におけるRNP顆粒の形成機構と機能
Publicly Offered Research
| Project Area | Mechanisms regulating gamete formation in animals |
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| Project/Area Number |
26114505
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| Research Institution | Yokohama National University |
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Principal Investigator |
鈴木 敦 横浜国立大学, 工学(系)研究科(研究院), 准教授 (60467058)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | RNP顆粒 / 生殖細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Dead endは脊椎動物間で保存されたRNA結合タンパク質であり、ゼブラフィッシュおいて生殖細胞の発生に必須であることが報告されている。マウスにおけるホモログ遺伝子Dead end1（Dnd1）は発生直後の始原生殖細胞に発現し、かつ、そのnull変異個体においては、移動期の始原生殖細胞が劇的に減少することが知られている。このことから、マウスDND1は移動期の始原生殖細胞の発生に重要であることが明らかになっている。しかしながら、生殖巣に到達した後の雄性分化におけるDND1の機能については不明であった。本研究において、申請者はまず、雄性始原生殖細胞におけるDND1を免疫学的手法で可視化したところ、RNP顆粒に局在することが明らかになった。そこで、DND1の条件付き欠損マウスを用いて始原生殖細胞が生殖巣に到達した後にDND1を欠損させたところ、このRNP顆粒はほぼ完全に消失した。DND1が制御するRNP顆粒形成機構を明らかにするために、DND1-3FLAGを発現するトランスジェニックマウスを利用して、FLAGタグを利用した免疫沈降によってDND1に結合するタンパク質とRNAの同定を行った。その結果、約20種類のDND1結合タンパク質の候補と、数百種類のDND1結合RNAを同定した。平成27年度においては、これらの因子とDND1との結合について、生化学的、細胞生物学的に解析し、生殖細胞に特異的なRNP顆粒形成機構を明らかにすることを目指す。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
DND1に結合するタンパク質を同定し、RNP顆粒を形成するメカニズムについて培養細胞を用いて解析する系を立ち上げた。また、これらの因子についてin vivoで解析するための強制発現と機能喪失のマウスも作成している。おおむね順調である。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は引き続き培養細胞でRNP顆粒形成をアッセイする系を用いて、全てのDND1結合タンパク質候補について解析を行う。一方で、作製途上のマウスが成熟したら、in vivoにおけるRNP顆粒の状態を解析する。
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[Presentation] 10.1242/bio.20149308.2014
Author(s)
Atsushi Suzuki
Organizer
Germ Cell meeting, Cold Spring Harbor Laboratory
Place of Presentation
Cold Spring Harbor Laboratory, New York, USA
Year and Date
2014-10-07 – 2014-10-11
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