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Planned Research

Project AreaChromatin potential for gene regulation
Project/Area Number 18H05528
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionKindai University

Principal Investigator

山縣 一夫  近畿大学, 生物理工学部, 教授 (10361312)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 原口 徳子  大阪大学, 生命機能研究科, 特任教授 (20359079)
Project Period (FY) 2018-06-29 – 2023-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help
¥169,520,000 (Direct Cost: ¥130,400,000、Indirect Cost: ¥39,120,000)
Fiscal Year 2022: ¥30,680,000 (Direct Cost: ¥23,600,000、Indirect Cost: ¥7,080,000)
Fiscal Year 2021: ¥30,680,000 (Direct Cost: ¥23,600,000、Indirect Cost: ¥7,080,000)
Fiscal Year 2020: ¥30,680,000 (Direct Cost: ¥23,600,000、Indirect Cost: ¥7,080,000)
Fiscal Year 2019: ¥30,680,000 (Direct Cost: ¥23,600,000、Indirect Cost: ¥7,080,000)
Fiscal Year 2018: ¥46,800,000 (Direct Cost: ¥36,000,000、Indirect Cost: ¥10,800,000)
Keywords細胞核 / 人工核 / クロマチン / ライブセルイメージング / 哺乳動物受精卵
Outline of Annual Research Achievements

本研究は、(1)DNAなど特定要素(群)を用いて初期胚内に人工核を創出する再構成技術、(2)受精卵において特異的な領域にエピゲノム編集を行う技術を開発し、それらと(3)超解像イメージングなどの計測技術を組み合わせることで、初期胚核が機能性を獲得していく機序を理解することを目的とする。
(1)人工核の創出:当該年度は、導入する要素を検討した結果、長鎖DNA(約166 kbp)を発生開始直後の卵子に導入することで、核移行活性を持つ人工核の作製に成功した。この人工核は核小体様構造を有しており、明視野レベルでは天然核と酷似していた(Yonezawa et al., in prep)。体細胞で人工核を創出する目的で、培養細胞にプラスミドDNAを導入したところ、DNA塊周辺には核膜孔のない“牢屋”核膜が形成され、その疑似核は転写不活性であった(Haraguchi et al., Commun Biol, 2022)。
(2)エピゲノム編集:卵子において染色体セントロメア領域のminor satellite配列に人為的にDNAメチル化を導入した場合、第1および第2減数分裂には影響はないが、受精後4細胞期付近で発生が顕著に停止し、特にG2期が遅延・停止していることがわかった(Yamazaki et al., in prep)。
(3)クロマチン計測:当該年度報告した低侵襲性の超解像ライブセルイメージング(Hatano et al., Genes to Cells, 2022)を用いて転写におけるRNA polymerase IIのリン酸化状況を生きたまま観察することに成功した。また、この技術を応用し、培養環境の変化が分裂速度に与える影響の定量化を行い、現在論文投稿中である(Mashiko et al., under revision; Yao et al., submitted)。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

(1)人工核の創出:これまで予定通りにマウス受精卵内で人工核を作製し、その正常性についてライブセルイメージングや電子顕微鏡を用いた解析をすすめ、派生した成果を含めて複数論文化した。当該年度は、核移行活性を持つ人工核の創出に成功し、学会や研究会で発表しており、本年度中の論文発表を目指す。
(2)エピゲノム編集:これまでにTALE法を用いたmajor satelliteへのDNAメチル化導入に成功し論文化した。現在、それをminor satelliteにも応用し、受精卵に加えて未成熟卵子やES細胞での導入にも成功している。現在、本年度中の論文投稿を見据えて、生殖細胞におけるセントロメア低DNAメチル化に関する分子メカニズムや生物学的意義について最終的な検討を行っている。一方、当初予定だったCRISPR/dCASシステムを用いた方法ではオフターゲットが見られ、配列特異的なDNAメチル化導入を実現することができていない。
(3)クロマチン計測:当該年度までに低侵襲な超解像ライブセルイメージングの開発をすすめ、それを用いてマウス受精卵の染色体を生きたまま観察し、その本数や構造を測定することに成功、論文発表を行った。本年度はこの系を応用し、木村宏計画研究の開発したRNA polymerase II mintbodyの系を用いて、受精卵における遺伝子転写を生きたまま観察・計測する試みを行っている。さらに、ここで開発された測定技術を応用し、ヒト胚やウシ胚の分裂速度の測定や、培養環境の変化がそれに与える影響の定量化を行い、現在複数論文投稿中である。
以上から、人工核やエピゲノム編集に関しては当該年度では論文準備中の段階であるものの投稿直前であり、クロマチン計測に関しては論文発表済みないしは投稿中であることから、研究はおおむね順調に進展していると判断した。

Strategy for Future Research Activity

以下、(1)人工核の創出、(2)エピゲノム編集、(3)クロマチン計測に関して、項目ごとに進捗と実施計画を述べる
(1)人工核の創出:当該年度はスタート物質にT4 phage DNA等の長鎖DNAを用いることで受精卵内に核移行活性を持つ人工核を構築できた。そこで本年度は電子顕微鏡解析などの核構造に関する詳細なデータを加えてその成果を論文化することと並行し、OriCiro Genomics社の技術などを用いて転写ユニットやセントロメアサテライト配列を持つ長鎖DNAを合成し、転写や複製・分配を行う完全な人工核の創出を目指す。転写能の検討には、木村宏計画研究が開発したリン酸化RNA polymerase IIの可視化技術や、蛍光モルフォリノRNA技術などを、(3)で開発した低侵襲の超解像イメージングを用いて計測する。これら方法によって人工核において転写が見られたら、時期特異的プロモーターなどにDNAを変更し、それへの転写因子の結合や、そのエピジェネティック状況の違いなどを経時的に測定することで、初期胚における核の機能性獲得機序の理解につなげる。
(2)エピゲノム編集:上述の通り、すでにマウス受精卵において染色体セントロメアに存在するmajorおよびminor satellite配列特異的に人為的にDNAメチル化を導入することに成功している。本年度は、これら技術と(1)を組み合わせ、受精卵人工細胞核中の特定のCpGサイトにDNAメチル化を導入し、その転写への影響を(3)の手法で計測する。また、生殖細胞特異的なセントロメア領域低DNAメチル化に関する分子メカニズムや生物学的意義について、さらに検討を進める。
(3)クロマチン計測:当該年度までに開発した低侵襲性の超解像ライブセルイメージングを応用し、本年度は上記で検討する人工細胞核やエピゲノム編集後の細胞核・人工核の観察・計測を行う。

Report

(4 results)
  • 2021 Annual Research Report
  • 2020 Annual Research Report
  • 2019 Annual Research Report
  • 2018 Annual Research Report

Research Products

(159 results)

All 2022 2021 2020 2019 2018 Other

All Int'l Joint Research (4 results) Journal Article (33 results) (of which Int'l Joint Research: 11 results,  Peer Reviewed: 31 results,  Open Access: 33 results) Presentation (115 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Invited: 30 results) Book (4 results) Remarks (1 results) Patent(Industrial Property Rights) (2 results) (of which Overseas: 1 results)

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    • Author(s)
      Matsumori Haruka、Watanabe Kenji、Tachiwana Hiroaki、Fujita Tomoko、Ito Yuma、Tokunaga Makio、Sakata-Sogawa Kumiko、Osakada Hiroko、Haraguchi Tokuko、Awazu Akinori、Ochiai Hiroshi、Sakata Yuka、Ochiai Koji、Toki Tsutomu、Ito Etsuro、Goldberg Ilya G、Tokunaga Kazuaki、Nakao Mitsuyoshi、Saitoh Noriko
    • Journal Title

      Life Sci Alliance

      Volume: 5 Pages: 1-18

    • DOI

      10.26508/lsa.202101045

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  • [Journal Article] Rec8 Cohesin-mediated Axis-loop chromatin architecture is required for meiotic recombination2022

    • Author(s)
      Sakuno Takeshi、Tashiro Sanki、Tanizawa Hideki、Iwasaki Osamu、Ding Da-Qiao、Haraguchi Tokuko、Noma Ken-ichi、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Nucleic Acids Research

      Volume: -

    • DOI

      10.1093/nar/gkac183

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  • [Journal Article] Transfected plasmid DNA is incorporated into the nucleus via nuclear envelope reformation at telophase2022

    • Author(s)
      Haraguchi Tokuko、Koujin Takako、Shindo Tomoko、Sukriye Bilir、Osakada Hiroko、Nishimura Kohei、Hirano Yasuhiro、Asakawa Haruhiko、Mori Chie、Kobayashi Shouhei、Okada Yasushi、Chikashige Yuji、Fukagawa Tatsuo、Shibata Shinsuke、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Communication Biology

      Volume: 5 Pages: 78-78

    • DOI

      10.1038/s42003-022-03021-8

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] DNA replication fork speed underlies cell fate changes and promotes reprogramming2022

    • Author(s)
      Nakatani T、Lin J、Ji F、Ettinger A、Pontabry J、Tokoro M、Altamirano-Pacheco L、Fiorentino J、Mahammadov Elmir、Hatano Y、Van Rechem C、Chakraborty D、Ruiz-Morales E R.、Arguello Pascualli P Y.、Scialdone A、Yamagata K、Whetstine J R.、Sadreyev R I.、Torres-Padilla M-E
    • Journal Title

      Nature Genetics

      Volume: 54 Pages: 318-327

    • DOI

      10.1038/s41588-022-01023-0

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Chromosome counting in the mouse zygote using low‐invasive super‐resolution live‐cell imaging2022

    • Author(s)
      Hatano Yu、Mashiko Daisuke、Tokoro Mikiko、Yao Tatsuma、Yamagata Kazuo
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: 27 Pages: 214-228

    • DOI

      10.1111/gtc.12925

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  • [Journal Article] Chromatin loading of MCM hexamers is associated with di-/tri-methylation of histone H4K20 toward S phase entry.2022

    • Author(s)
      Hayashi-Takanaka Y, Hayashi Y, Hirano Y, Miyawaki-Kuwakado A, Ohkawa Y, Obuse C, Kimura H, Haraguchi T, Hiraoka Y.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Research

      Volume: 49 Pages: 12152-12166

    • DOI

      10.1093/nar/gkab1068

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  • [Journal Article] RanGTP and the actin cytoskeleton keep paternal and maternal chromosomes apart during fertilization2021

    • Author(s)
      Mori Masashi、Yao Tatsuma、Mishina Tappei、Endoh Hiromi、Tanaka Masahito、Yonezawa Nao、Shimamoto Yuta、Yonemura Shigenobu、Yamagata Kazuo、Kitajima Tomoya S.、Ikawa Masahito
    • Journal Title

      Journal of Cell Biology

      Volume: 220

    • DOI

      10.1083/jcb.202012001

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  • [Journal Article] Microtubule inhibitors identified through nonbiased screening enhance DNA transfection efficiency by delaying p62-dependent ubiquitin recruitment2021

    • Author(s)
      Megumi Tsuchiya, Hidesato Ogawa, Kento Watanabe, Takako Koujin, Chie Mori, Kazuto Nunomura, Bangzhong Lin, Akiyoshi Tani, Yasushi Hiraoka, Tokuko Haraguchi
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: 26 Pages: 739-751

    • DOI

      10.1111/gtc.12881

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  • [Journal Article] Deep learning-based algorithm for predicting the live birth potential of mouse embryos2021

    • Author(s)
      Tokuoka Yuta、Yamada Takahiro G.、Mashiko Daisuke、Ikeda Zenki、Kobayashi Tetsuya J.、Yamagata Kazuo、Funahashi Akira
    • Journal Title

      bioRxiv

      Volume: -

    • DOI

      10.1101/2021.08.19.456065

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  • [Journal Article] Chromosome counting in the mouse and human zygote using low-invasive super-resolution live-cell imaging2021

    • Author(s)
      Hatano Yu、Mashiko Daisuke、Tokoro Mikiko、Yao Tatsuma、Hirao Ryota、Kitasaka Hiroya、Fukunaga Noritaka、Asada Yoshimasa、Yamagata Kazuo
    • Journal Title

      bioRxiv

      Volume: -

    • DOI

      10.1101/2021.03.14.435348

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  • [Journal Article] Zygotic Nuclear F-Actin Safeguards Embryonic Development2020

    • Author(s)
      Okuno Tomomi、Li Wayne Yang、Hatano Yu、Takasu Atsushi、Sakamoto Yuko、Yamamoto Mari、Ikeda Zenki、Shindo Taiki、Plessner Matthias、Morita Kohtaro、Matsumoto Kazuya、Yamagata Kazuo、Grosse Robert、Miyamoto Kei
    • Journal Title

      Cell Reports

      Volume: 31 Pages: 107824-107824

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2020.107824

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  • [Journal Article] 3D convolutional neural networks-based segmentation to acquire quantitative criteria of the nucleus during mouse embryogenesis2020

    • Author(s)
      Tokuoka Yuta、Yamada Takahiro G.、Mashiko Daisuke、Ikeda Zenki、Hiroi Noriko F.、Kobayashi Tetsuya J.、Yamagata Kazuo、Funahashi Akira
    • Journal Title

      NPJ SYSTEMS BIOLOGY AND APPLICATIONS

      Volume: 6 Pages: 1-12

    • DOI

      10.1038/s41540-020-00152-8

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  • [Journal Article] Transient Breakage of the Nucleocytoplasmic Barrier Controls Spore Maturation via Mobilizing the Proteasome Subunit Rpn11 in the Fission Yeast Schizosaccharomyces pombe2020

    • Author(s)
      Yang Hui-Ju、Asakawa Haruhiko、Ohtsuki Chizuru、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Journal of Fungi

      Volume: 6 Pages: 242-242

    • DOI

      10.3390/jof6040242

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  • [Journal Article] Nuclear Envelope Proteins Modulating the Heterochromatin Formation and Functions in Fission Yeast2020

    • Author(s)
      Hirano Yasuhiro、Asakawa Haruhiko、Sakuno Takeshi、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Cells

      Volume: 9 Pages: 1908-1908

    • DOI

      10.3390/cells9081908

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  • [Journal Article] High-Accuracy Correction of 3D Chromatic Shifts in the Age of Super-Resolution Biological Imaging Using <em>Chromagnon</em>2020

    • Author(s)
      Matsuda Atsushi、Koujin Takako、Schermelleh Lothar、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Journal of Visualized Experiments

      Volume: 160 Pages: 1-22

    • DOI

      10.3791/60800

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  • [Journal Article] Lem2 and Lnp1 maintain the membrane boundary between the nuclear envelope and endoplasmic reticulum2020

    • Author(s)
      Hirano Yasuhiro、Kinugasa Yasuha、Osakada Hiroko、Shindo Tomoko、Kubota Yoshino、Shibata Shinsuke、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Communications Biology

      Volume: 3 Pages: 1-14

    • DOI

      10.1038/s42003-020-0999-9

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  • [Journal Article] Chromosome segregation error during early cleavage in mouse pre-implantation embryo does not necessarily cause developmental failure after blastocyst stage2020

    • Author(s)
      Mashiko Daisuke、Ikeda Zenki、Yao Tatsuma、Tokoro Mikiko、Fukunaga Noritaka、Asada Yoshimasa、Yamagata Kazuo
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 10 Pages: 854-854

    • DOI

      10.1038/s41598-020-57817-x

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  • [Journal Article] Improved Methods for Preparing the Telomere Tethering Complex Bqt1-Bqt2 for Structural Studies2020

    • Author(s)
      Yuzurihara H, Aizawa Y, Saotome M, Ichikawa Y, Yokoyama H, Chikashige Y, Haraguchi T, Hiraoka Y, Kurumizaka H, Kagawa W
    • Journal Title

      The Protein Journal

      Volume: - Pages: 174-181

    • DOI

      10.1007/s10930-020-09887-z

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      2019 Annual Research Report
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  • [Journal Article] Intracellular ATP levels influence cell fates in Dictyostelium discoideum differentiation2020

    • Author(s)
      Hiraoka Haruka、Nakano Tadashi、Kuwana Satoshi、Fukuzawa Masashi、Hirano Yasuhiro、Ueda Masahiro、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: - Pages: 312-326

    • DOI

      10.1111/gtc.12763

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  • [Journal Article] Human Ebp1 rescues the synthetic lethal growth of fission yeast cells lacking Cdb4 and Nup1842020

    • Author(s)
      Osemwenkhae Osaretin P.、Sakuno Takeshi、Hirano Yasuhiro、Asakawa Haruhiko、Hayashi‐Takanaka Yoko、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: - Pages: 288-295

    • DOI

      10.1111/gtc.12757

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  • [Journal Article] Roles of Remote and Contact Forces in Epithelial Cell Structure Formation2020

    • Author(s)
      Nakano Tadashi、Okaie Yutaka、Kinugasa Yasuha、Koujin Takako、Suda Tatsuya、Hiraoka Yasushi、Haraguchi Tokuko
    • Journal Title

      Biophysical Journal

      Volume: 118 Pages: 1466-1478

    • DOI

      10.1016/j.bpj.2020.01.037

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  • [Journal Article] Normal B cell development and Pax5 expression in Thy28/ThyN1-deficient mice2019

    • Author(s)
      Kitaura Fusako、Yuno Miyuki、Fujita Toshitsugu、Wakana Shigeharu、Ueda Jun、Yamagata Kazuo、Fujii Hodaka
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 14

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0220199

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  • [Journal Article] Nuclear formation induced by DNA-conjugated beads in living fertilised mouse egg.2019

    • Author(s)
      Yuka Suzuki, Sukriye Bilir, Yu Hatano, Tatsuhito Fukuda, Daisuke Mashiko, Shouhei Kobayashi, Yasushi Hiraoka, Tokuko Haraguchi, Kazuo Yamagata
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 9 Pages: 8461-8461

    • DOI

      10.1038/s41598-019-44941-6

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  • [Journal Article] Histone H3K9 Methyltransferase G9a in Oocytes Is Essential for Preimplantation Development but Dispensable for CG Methylation Protection.2019

    • Author(s)
      Yeung WKA, Brind’Amour J, Hatano Y, Yamagata K, Feil R, Matthew C. Lorincz MC, Tachibana M, Shinkai Y, Sasaki H*.
    • Journal Title

      Cell Reports

      Volume: 27 Pages: 282-283

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2019.03.002

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  • [Journal Article] Chromosome-associated RNA ;protein complexes promote pairing of homologous chromosomes during meiosis in Schizosaccharomyces pombe.2019

    • Author(s)
      Ding DQ, Okamasa K, Katou Y, Oya E, Nakayama J, Chikashige Y, Shirahige K, Haraguchi T, Hiraoka Y.
    • Journal Title

      Nature Communications

      Volume: 10 Pages: 5598-5598

    • DOI

      10.1038/s41467-019-13609-0

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  • [Journal Article] Asymmetrical localization of Nup107-160 subcomplex components within the nuclear pore complex in fission yeast2019

    • Author(s)
      Asakawa Haruhiko、Kojidani Tomoko、Yang Hui-Ju、Ohtsuki Chizuru、Osakada Hiroko、Matsuda Atsushi、Iwamoto Masaaki、Chikashige Yuji、Nagao Koji、Obuse Chikashi、Hiraoka Yasushi、Haraguchi Tokuko
    • Journal Title

      PLoS Genet.

      Volume: 15 Pages: 008061-1008061

    • DOI

      10.1371/journal.pgen.1008061

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  • [Journal Article] The very-long-chain fatty acid elongase Elo2 rescues lethal defects associated with loss of the nuclear barrier function in fission yeast cells2019

    • Author(s)
      Kinugasa Yasuha、Hirano Yasuhiro、Sawai Megumi、Ohno Yusuke、Shindo Tomoko、Asakawa Haruhiko、Chikashige Yuji、Shibata Shinsuke、Kihara Akio、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi
    • Journal Title

      Journal of Cell Science

      Volume: 132 Pages: 229021-229021

    • DOI

      10.1242/jcs.229021

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  • [Journal Article] Histone H2A insufficiency causes chromosomal segregation defects due to anaphase chromosome bridge formation at rDNA repeats in fission yeast.2019

    • Author(s)
      Yamamoto TG, Ding DQ, Nagahama Y, Chikashige Y, Haraguchi T, Hiraoka Y.
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 9 Pages: 7159-7159

    • DOI

      10.1038/s41598-019-43633-5

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      Sukriye Bilir、Tomoko Kojidani、Chie Mori、Hiroko Osakada、Shouhei Kobayashi、Takako Koujin、Yasushi Hiraoka 、Tokuko Haraguchi
    • Journal Title

      Genes to Cells

      Volume: 印刷中 Pages: 338-353

    • DOI

      10.1111/gtc.12677

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      Kurokawa K, Osakada H, Kojidani T, Waga M, Suda Y, Asakawa H, Haraguchi T, Nakano A.
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      Journal of Cell Biology

      Volume: - Pages: 1602-1618

    • DOI

      10.1083/jcb.201807194

    • NAID

      120007133506

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      Iwamoto Masaaki、Fukuda Yasuhiro、Osakada Hiroko、Mori Chie、Hiraoka Yasushi、Haraguchi Tokuko
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      Gene: X

      Volume: 1 Pages: 100006-100006

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      10.1016/j.gene.2019.100006

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      Takao Kazutaka、Takamiya Kazunori、Ding Da-Qiao、Haraguchi Tokuko、Hiraoka Yasushi、Nishimori Hiraku、Awazu Akinori
    • Journal Title

      J. Phys. Soc. Jpn.

      Volume: 88 Issue: 2 Pages: 023801-023801

    • DOI

      10.7566/jpsj.88.023801

    • NAID

      210000135084

    • ISSN
      0031-9015, 1347-4073
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      Kazuo Yamagata, Kouhei Nagai, Hiroshi Miyamoto, ...., Tetsuya Handa (17番目), Hiroshi Kimura, Yoshihiko Hosoi, Tasuku Mitani, Kazuya Matsumoto, Akira Iritani
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 9 巻 Pages: 4050-4050

    • DOI

      10.1038/s41598-019-40546-1

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      第37回日本受精着床学会
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      第42回日本分子生物学会年会
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      第42回日本分子生物学会年会
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      第42回日本分子生物学会年会
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      谷口稜弥、波多野裕、山﨑大賀、舛本寛、小布施力史、山縣一夫
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      第42回日本分子生物学会年会
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      第42回日本分子生物学会年会
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      第42回日本分子生物学会年会
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      EMBO 2019 Workshop on fission yeast 10TH international meeting、 Barcelona
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      EMBO 2019 Workshop on fission yeast 10TH international meeting、 Barcelona
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      第71回日本細胞生物学会年会
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      第37回染色体ワークショップ・第18回細胞核ダイナミクス研究会
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      平野泰弘、衣笠泰葉、原口徳子、平岡泰
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      第42回日本分子生物学会年会
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      第11回光塾
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      小川英知、土屋惠、渡邊賢人、平岡泰、原口徳子
    • Industrial Property Rights Holder
      小川英知、土屋惠、渡邊賢人、平岡泰、原口徳子
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Filing Date
      2020
    • Related Report
      2019 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] Light detecting device ad laser microscope system2019

    • Inventor(s)
      原口徳子、平岡泰、他
    • Industrial Property Rights Holder
      原口徳子、平岡泰、他
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Filing Date
      2019
    • Related Report
      2019 Annual Research Report
    • Overseas

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Published: 2018-07-20   Modified: 2022-12-28  

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