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Mechanisms of constructing totipotent nuclei

Planned Research

Project AreaProgram of totipotency: From decoding to designing
Project/Area Number 19H05751
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionKindai University

Principal Investigator

宮本 圭  近畿大学, 生物理工学部, 准教授 (40740684)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 島本 勇太  国立遺伝学研究所, 遺伝メカニズム研究系, 准教授 (80409656)
Project Period (FY) 2019-06-28 – 2024-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help
¥106,860,000 (Direct Cost: ¥82,200,000、Indirect Cost: ¥24,660,000)
Fiscal Year 2022: ¥20,540,000 (Direct Cost: ¥15,800,000、Indirect Cost: ¥4,740,000)
Fiscal Year 2021: ¥20,540,000 (Direct Cost: ¥15,800,000、Indirect Cost: ¥4,740,000)
Fiscal Year 2020: ¥20,540,000 (Direct Cost: ¥15,800,000、Indirect Cost: ¥4,740,000)
Fiscal Year 2019: ¥24,700,000 (Direct Cost: ¥19,000,000、Indirect Cost: ¥5,700,000)
Keywords全能性 / 核形成 / 核アクチン / 物性 / 再プログラム化 / 核構造 / 核骨格 / リプログラミング / 転写 / 機械特性 / マウス
Outline of Research at the Start

受精卵の全能性を支える核、即ち「全能性核」は、初期発生の特定の時期のみ存在する。全能性核の構築機構の解明は、全能性獲得の本質を理解する上で重要で、さらには全能性を有する核の再構築へとつながる。しかし、全能性核のどのような性質が他の分化した核と異なるかについての知見は極めて乏しい。そこで本研究では、①全能性核の形成過程を詳細に調べ、核形成に必要な因子を同定する。さらに、②全能性核のみが有する機械的特性を明らかにする。③これらの解析を通じ、最終的には全能性核の再構築を試みる。

Outline of Annual Research Achievements

精子核や体細胞核は卵細胞内で再プログラム化され、全ての細胞へと分化する全能性を獲得する。全能性獲得過程で、これらの核は急激に膨化し、脱凝縮したクロマチンを有する特徴的な形態を示す。このようにして胚の全能性を支える核、即ち「全能性核」がつくり上げられるが、その核内構造や核形成にかかわる因子が全能性のプログラムといかに関連しているかについてはほとんど分かっていない。さらに近年、核の機能がその機械的性質と相関することを示唆する研究結果が数多く報告されているが、全能性核についての知見は極めて乏しい。そこで本研究では、全能性を有するマウス受精卵や初期胚期における核の機能に着目し、少数細胞解析技術や生物物理解析手法を駆使し、核形成や機能維持に関わる因子やその作用機序解明を目指す。
マウス受精卵前核内の核骨格構造を調べたところ、核内に存在するアクチンタンパク質(核アクチン)が、通常の体細胞では見られない特殊な重合化核アクチンのネットワークを作り出していることを発見した。この前核内アクチンを受精卵特異的重合化核アクチンと名付け、その機能を探ったところ、受精後にゲノムに蓄積するDNA損傷の修復に重要であることがわかった。さらに、受精卵と比較して低い発生能を示すことが知られる体細胞クローン胚において、1細胞期の核内に形成される重合化核アクチンの構造に顕著な異常が確認された。このように、受精卵特異的重合化核アクチンの発生における役割の一つを明らかにするとともに、体細胞クローン胚に観察される異常として核骨格の形成不全を新たに発見した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

令和2年度の実験においては、受精卵特異的重合化核アクチンの発生における役割として、受精後にゲノムに蓄積するDNA損傷の修復促進機能があることを示した。特に、この重合化核アクチンによるDNA損傷修復促進によって、マウス1細胞期胚におけるDNA損傷チェックポイントの活性化を妨げ、結果として受精卵の正常な発生が担保されるという胚発生モデルを示した。また、重合化核アクチンの検出条件を最適化したうえで、体細胞クローン胚におけるアクチンの核骨格構造を調べた結果、クローン胚の核骨格形成異常を発見した。
次に、マウス初期胚における核の硬さや粘弾性の変化を調べる実験においては、単離した初期胚核を用いて、初期胚核が体細胞核と比較して極度に柔らかい特殊な性質を有することを見出した。そこで、生細胞において核の粘弾性の変化を計測する実験システムを構築するため、マウス初期胚のライブセルイメージングを通じた核の形状変化に着目した。Histone H2Bに蛍光タンパク質を標識した融合タンパク質を初期胚に発現させ、核形状変化を計測したところ、初期胚の特定の時期に核が特殊な形状変化を示す現象を発見した。
最後に、全能性核の特性を模倣した核の再構築について進捗を述べる。我々は、細胞周期を人為的に停止させた初期胚に培養細胞核を移植することで、移植した細胞核がレシピエントの胚のクロマチン・転写状態に近づくことを発見した。この実験系を利用し、分化した細胞核を停止した2,4細胞期胚に移植すると、それぞれの発生時期特異的マーカーの活性化が移植核から確認され、移植核の状態が初期胚様に変化する可能性を示した。このように、細胞核のクロマチン・遺伝子発現状態を直接的に初期化するシステムを立ち上げた。

Strategy for Future Research Activity

令和3年度は、昨年度に引き続き以下に示す3つの方向性で研究を進める。
(1) 受精卵特異的核骨格構造の発生生物学的意義の解明:令和2年度の実験により、受精卵特異的重合化核アクチンのDNA損傷修復促進を介した胚発生への寄与を示した。引き続き重合化核アクチンの機能を探索した結果、胚性ゲノム活性化への関与を示唆するデータがRNA-seq解析により得られた。そこで、重合化核アクチンが胚性ゲノム活性化を制御する分子機序の解明を目指す。また、重合化核アクチンが受精卵にのみ多く存在する理由の解明に向けて、その上流因子についても調べる。
(2) マウス初期胚における核の硬さや粘弾性の変化:令和2年度の実験から、初期胚の特定の時期に核の形状が顕著に変化することを見出した。そこで本年度は、この核の形状変化が遺伝子発現や胚発生に与える影響を明らかにすることを目標にする。この目標達成のためには、人為的に核の形状を変化させる実験システムの構築が必要となり、2つのアプローチでその実現を目指す。1つは、磁気ビーズを用いた核膜の人為的変形誘導である。さらにもう1つのアプローチとして、核の形状変化に関わることが知られている核アクチン重合化因子の発現制御を計画する。これらのアプローチを通じて、胚発生の特定時期に一過的に起こる核の形状変化の生物学的意義を探る。
(3) 全能性核の特性を模倣した核の再構築系の探索:我々が独自に開発した核移植法を用いて、全能性を有する2細胞期胚を停止させ、停止胚への核移植により、2細胞期様の特性を持った初期胚核を人為的に作出できる可能性を示した。今年度はこの新規核移植法を利用し作出した人工2細胞期様核の特性を、網羅的遺伝子発現解析などを用いて調べる。

Report

(2 results)
  • 2020 Annual Research Report
  • 2019 Annual Research Report

Research Products

(64 results)

All 2021 2020 2019 Other

All Int'l Joint Research (5 results) Journal Article (10 results) (of which Int'l Joint Research: 6 results,  Peer Reviewed: 8 results,  Open Access: 8 results) Presentation (42 results) (of which Int'l Joint Research: 4 results,  Invited: 11 results) Book (2 results) Remarks (3 results) Patent(Industrial Property Rights) (2 results)

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  • [Journal Article] Nucleoskeleton proteins for nuclear dynamics2021

    • Author(s)
      Miyamoto Kei、Harata Masahiko
    • Journal Title

      J Biochem.

      Volume: - Pages: 237-241

    • DOI

      10.1093/jb/mvab006

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  • [Journal Article] Local body weight measurement of the spindle2021

    • Author(s)
      Tanaka Masahito、Shimamoto Yuta
    • Journal Title

      Developmental Cell

      Volume: 56 Pages: 871-872

    • DOI

      10.1016/j.devcel.2021.03.019

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  • [Journal Article] Zygotic Nuclear F-Actin Safeguards Embryonic Development2020

    • Author(s)
      Okuno Tomomi、Li Wayne Yang、Hatano Yu、Takasu Atsushi、Sakamoto Yuko、Yamamoto Mari、Ikeda Zenki、Shindo Taiki、Plessner Matthias、Morita Kohtaro、Matsumoto Kazuya、Yamagata Kazuo、Grosse Robert、Miyamoto Kei
    • Journal Title

      Cell Reports

      Volume: 31 Pages: 107824-107824

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2020.107824

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Nanoscopic changes in the lattice structure of striated muscle sarcomeres involved in the mechanism of spontaneous oscillatory contraction (SPOC)2020

    • Author(s)
      Kono Fumiaki、Kawai Seitaro、Shimamoto Yuta、Ishiwata Shin’ichi
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 10

    • DOI

      10.1038/s41598-020-73247-1

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Visualization of endogenous nuclear F-actin in mouse embryos reveals abnormal actin assembly after somatic cell nuclear transfer.2020

    • Author(s)
      Shindo T, Ihashi S, Sakamoto Y, Okuno T, Tomikawa J, Miyamoto K.
    • Journal Title

      The Journal of Biochemistry

      Volume: mvaa125

    • DOI

      10.1093/jb/mvaa125

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  • [Journal Article] Mechanics of Cell Division2020

    • Author(s)
      Shimamoto Yuta、Redemann Stefanie、Needleman Daniel
    • Journal Title

      Frontiers in Cell and Developmental Biology

      Volume: 8

    • DOI

      10.3389/fcell.2020.620111

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    • Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Impairment of nuclear F-actin formation and its relevance to cellular phenotypes in Hutchinson-Gilford progeria syndrome2020

    • Author(s)
      Takahashi Yuto、Hiratsuka Shogo、Machida Nanako、Takahashi Daisuke、Matsushita Junpei、Hozak Pavel、Misteli Tom、Miyamoto Kei、Harata Masahiko
    • Journal Title

      Nucleus

      Volume: 11 Pages: 250-263

    • DOI

      10.1080/19491034.2020.1815395

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  • [Journal Article] The Actin-Family Protein Arp4 Is a Novel Suppressor for the Formation and Functions of Nuclear F-Actin2020

    • Author(s)
      Yamazaki Shota、Gerhold Christian、Yamamoto Koji、Ueno Yuya、Grosse Robert、Miyamoto Kei、Harata Masahiko
    • Journal Title

      Cells

      Volume: 9 Pages: 758-758

    • DOI

      10.3390/cells9030758

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    • Author(s)
      Higuchi Chika、Yamamoto Mari、Shin Seung-Wook、Miyamoto Kei、Matsumoto Kazuya
    • Journal Title

      Biology Open

      Volume: 8

    • DOI

      10.1242/bio.048652

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  • [Journal Article] Active Fluctuations of the Nuclear Envelope Shape the Transcriptional Dynamics in Oocytes2019

    • Author(s)
      Almonacid Maria、Al Jord Adel、El-Hayek Stephany、Othmani Alice、Coulpier Fanny、Lemoine Sophie、Miyamoto Kei、Grosse Robert、Klein Christophe、Piolot Tristan、Mailly Philippe、Voituriez Raphaell、Genovesio Auguste、Verlhac Marie-Helene
    • Journal Title

      Developmental Cell

      Volume: 51 Pages: 145-157

    • DOI

      10.1016/j.devcel.2019.09.010

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  • [Presentation] 核内アクチン繊維形成とゲノム機能制御におけるアクチンファミリーArp4の役割2021

    • Author(s)
      上野 佑也, 山崎 祥他, GERHOLD Christia, 山本 浩志, 宮本 圭, 原田 昌彦
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      日本農芸化学会2021年度大会
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      宮本 圭
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      第14回日本エピジェネティクス研究会年会
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      宮本圭
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      第93回 日本生化学会大会
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  • [Presentation] Mesoscale microtubule mechanics controlling the assembly and function of the chromosome segregation machinery2020

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  • [Presentation] マウス初期胚を用いた体細胞核の転写リプログラミング誘2020

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      宮本圭
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  • [Presentation] Gabpb1遺伝子のマウス初期胚発生における機能解析2020

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      井橋俊哉, 濱中瑞斗, 加地正弥, 森美樹, 今里佑馬, 日下部春奈, 梶栗尚明, 松澤由佳, 山本真理, 坂本裕子, 辻本佳加理, 笠原喜斗, 眞銅大暉, 松本和也, 伊川正人, 宮本圭
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      島本勇太
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  • [Presentation] Gabpb1遺伝子のマウス初期胚発生における役割2020

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      井橋俊哉, 濱中瑞斗, 加地正弥, 森美樹, 今里佑馬, 日下部春奈, 梶栗尚明, 松澤由佳, 山本真理, 坂本裕子, 辻本佳加理, 笠原喜斗, 眞銅大暉, 松本和也, 伊川正人, 宮本圭
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      宮本圭
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      新学術領域研究『配偶子インテグリティの構築』『全能性プログラム』合同公開シンポジウム2020
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  • [Presentation] 体細胞核移植における全能性獲得に関与する遺伝子の機能解析 -Alyref および Gabpb1 の初期胚発生における役割-2020

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      井橋俊哉, 濱中瑞斗, 加地正弥, 森美樹, 今里佑馬, 日下部春奈, 梶栗尚明, 松澤由佳, 山本真理, 坂本裕子, 辻本佳加理, 笠原喜斗, 眞銅大暉, 松本和也, 伊川正人, 宮本圭
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      山本真理, Nicole Cheung, 塚口智将, 小林久人, 神尾明日香, 奥野智美, 神谷拓磨, 越智浩介, 井橋俊也, 辻本佳加理, 坂本裕子, 笠原善斗, 眞銅大暉, 河野友宏, 松本和也, 宮本圭
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      奥野智美, Wayne Yang Li, 波多野裕, 鷹巣篤志, 山本真理, 池田善貴, Matthias Plessner, 坂本裕子, 守田昂太郎, 松本和也, 山縣一夫, Robert Grosse, 宮本圭
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      井橋 俊哉, 濱中瑞斗, 加地正弥, 森美樹, 今里佑馬, 日下部春奈, 梶栗尚明, 松澤由佳, 神谷拓磨, 奥野智美, 山本真理, 越智浩介, 坂本裕子, 辻本佳加理, 笠原喜斗, 松橋珠子, 松本和也, 伊川正人, 宮本圭
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      新学術領域研究「全能性プログラム:デコーディングからデザインへ」若手勉強会2019
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  • [Presentation] マウス初期胚における核内アクチンタンパク質と初期細胞分裂の関係性2019

    • Author(s)
      坂本裕子, 奥野智美, Wayne Yang Li, 眞銅太暉, 鷹巣篤志, 山本真理, 波多野裕, 池田善貴, Matthias Plessner, 守田昂太郎, 松本和也, 山縣一夫, Robert Grosse, 宮本圭
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  • [Presentation] 光遺伝学ツールを用いた核アクチン重合化の促進と転写リプログラミングにおけるクロマチンタンパク質の動態2019

    • Author(s)
      辻本佳加理, 白水宗, 小林智輝, 西満里奈, 辻村翔子, 守屋朱香, 國富瑞生, 松橋珠子, 松本和也, Robert Grosse, 宮本圭
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      新学術領域研究「全能性プログラム:デコーディングからデザインへ」若手勉強会2019
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  • [Presentation] マウス受精卵を用いた内在性核内繊維状アクチンの可視化法の検討2019

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      眞銅 大暉, 坂本 裕子, 奥野 智美, Li Yang, 山本 真理, 神谷 拓磨, 越智 浩介, 井橋 俊哉, 辻本 佳加理, 笠原 喜斗, 松 橋 珠子, 松本 和也, Robert Grosse, 宮本 圭
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      第42回日本分子生物学会年会
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      宮本圭
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      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] カエル卵母細胞を用いた転写リプログラミング機構の解析2019

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      辻本 佳加理, 白水 宗, 小林 智輝, 西 満里奈, 辻村 翔子, 神谷 拓磨, 奥野 智美, 山本 真理, 越智 浩介, 井橋 俊哉, 坂本 裕子, 笠原 喜斗, 眞銅 大暉, 松橋 珠子, 松本 和也, Grosse Robert, 宮本 圭
    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] 核内アクチンタンパク質の重合化がマウス初期胚の細胞分裂に及ぼす影響2019

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      坂本 裕子, 奥野 智美, Li Yang, 山本 真理, 神谷 拓磨, 越智 浩介, 井橋 俊哉, 辻本 佳加理, 笠原 喜斗, 眞銅 大暉, 松 橋 珠子, 松本 和也, Robert Grosse, 宮本 圭
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      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] マウス初期胚発生における受精卵特異的重合化核アクチンの機能解析2019

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      奥野 智美, Li Wayne Yang, 波多野 裕, 鷹巣 篤志, 山本 真理, 池田 善貴, Matthias Plessner, 坂本 裕子, 守田 昂太郎, 松本 和也, 山縣 一夫, Robert Grosse, 宮本 圭
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      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] 細胞周期を停止したマウス初期胚による核リモデリング2019

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      神谷 拓磨, 西浦 伊織, 奥野 智美, 山本 真理, 越智 浩介, 井橋 俊哉, 辻本 佳加理, 坂本 裕子, 笠原 善斗, 眞銅 大暉, 松橋 珠子, 松本 和也, 宮本 圭
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      奥野 智美, Li Wayne Yang, 波多野 裕, 鷹巣 篤志, 山本 真理, 池田 善貴, Plessner Matthias, 坂本 裕子, 守田 昂太, 郎, 松本 和也, 山縣 一夫, Grosse Robert, 宮本 圭
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      第42回日本分子生物学会年会
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  • [Presentation] 核移植における体細胞核の全能性獲得に関与する遺伝子の機能解析2019

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      井橋 俊哉, 森 美樹, 今里 佑馬, 日下部 春奈, 梶栗 尚明, 松澤 由佳, 加地 正弥, 濱中 瑞斗, 神谷 拓磨, 奥野 智美, 山 本 真理, 越智 浩介, 坂本 裕子, 辻本 佳加理, 笠原 喜斗, 眞銅 大暉, 松橋 珠子, 伊川 正人, 松本 和也, 宮本 圭
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    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
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    • Total Pages
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    • Publisher
      医歯薬出版株式会社
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      https://researchmap.jp/KeiMiyamoto

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      https://www.researchgate.net/profile/Kei_Miyamoto

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      https://researchoutreach.org/tag/dr-kei-miyamoto/

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    • Industrial Property Rights Holder
      宮本圭、岩元正樹
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Filing Date
      2020
    • Acquisition Date
      2021
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  • [Patent(Industrial Property Rights)] バイオマーカーを用いた哺乳動物胚の選別方法2019

    • Inventor(s)
      宮本圭
    • Industrial Property Rights Holder
      近畿大学
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Filing Date
      2019
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Published: 2019-07-04   Modified: 2022-12-28  

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