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^<35>Cl NMRによる唾液線細胞内Clの動態計測

Research Project

Project/Area Number 01570052
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General physiology
Research InstitutionOkazaki National Research Institutes

Principal Investigator

村上 政隆  岡崎国立共同研究機構, 生理学研究所, 助教授 (10104275)

Project Period (FY) 1989
Project Status Completed (Fiscal Year 1989)
Budget Amount *help
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 1989: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Keywords外分泌腺 / 唾液腺 / 水分泌 / 細胞内Cl / NMR(核磁気共鳴) / シフト試薬
Research Abstract

外分泌腺の水分泌は管腔側膜からのCI分泌が細胞間隙あるいは細胞から水、Naを引き込むモデルが提出されているが、細胞内を通過するCIの動きは明らかでない。今回、化学シフト試薬としてCo(EDTA)を用い、唾液腺細胞内CIのNMR(核磁気共鳴)測定が可能になった。
方法:ラット(オス、Wistar)の顎下腺(0.2・0.3g)を摘出し、定流灌流した(2ml/min、25oC)。8.45Tの高分解NMR装置(BrukerWM360wb)に広帯域プロ-ブを35.28MHzに同調して用いた。細胞内外のClー35のNMR信号を分離するために化学シフト試薬としてCo(EDTA)20mMを灌流液に添加し用いた。
1.Co(EDTA)20mMにより灌流液のCl_ー35のNMR信号は1.245ppm低磁場側にシフトした。静止時の細胞内Clの信号は細胞外の信号の裾に埋もれ観測困難であり、静止時よりの変化を差スペクトルで観察した。
2.acetylcholine lμM投与によりOppmの信号が僅かに増大した。
3.ouabain lmMをAChに重畳すると0.97ppmの信号が連続的に増大した。Oppmの信号の変化は追跡不能であった。細胞外のCI増加は細胞外液区画の浮腫を示している。
4.acetylcholine 1mM投与ではOppm近辺の信号が1μMに比べ大きく増加した。高濃度acetylcholineで細胞内Naの著しい増加を報告したが、同時にClも増加することが示された。細胞内Naは刺激直後急速に増加したが、細胞内Clは10分以降にも増加しつづけた。
今回の実験ではacetylcholineによる細胞内Clの増加が明らかになった。しかし、5%以内と見積られる浮腫が細胞外Cl量を増加させ、細胞内Clの追跡を困難なものにした。これまで高灌流流速による細胞外区画の浮腫は約30分の灌流で安定することが腺重量測定より示されているが、今回の浮腫は僅かなものではあるが細胞内Clの追跡のために克服しなければならない。

Report

(1 results)
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All Other

All Publications (7 results)

  • [Publications] M.Murakami: "Direct measurement of K movement by 39K NMR in perfused rat mandibular salivary gland stumulated with acetylchline." Pflugers Arch.414. 385-392 ((1989))

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  • [Publications] E.Suzuki: "31P spinーlattice relaxation time measurements in biological systems:heart,liver,kidney and erythrocytes of rat." Jpn J.Magn Reson Med. 9. 115-120 ((1989))

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  • [Publications] T.Nakahari: "Shinkage of rat mandibular acinar cell with acetylcholine detected by videoーenhenced contrast microscopy." Jpn J Physiol. 39. 609-615 ((1989))

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  • [Publications] M.Murakami: "Oxygen consumption for K^+uptake during post-stimulatory activation of Na^+-,K+ATPase in perfused rat mandibular gland." J.Physiol. ((1990))

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  • [Publications] E.Suzuki: "Adenosine triphosphate compartmentation in the rat heart:a 31P spinーlattice relaxation study." J.Biochem. ((1990))

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  • [Publications] Y.Seo: "NMR characteristics of intracellular K in the rat salivary gland using 39K double quantum NMR spectroscopy." Biochemistry. 29. 599-603 ((1990))

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  • [Publications] M.Murakami: "Young/Wong(ed),Epithelial Secretion of Water and Electrolytes." Springer,Berlin,((1990))

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Published: 1989-04-01   Modified: 2016-04-21  

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