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糖尿病性血管障害に関する研究,血清中プロスタサイクリン産生刺激因子の基礎と臨床

Research Project

Project/Area Number 01570646
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 内分泌・代謝学
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

梅田 文夫  九州大学, 医学部, 講師 (80150431)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 久富 昭孝  九州大学, 医学部, 助手 (10208762)
Project Period (FY) 1989 – 1991
Project Status Completed (Fiscal Year 1991)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 1991: ¥400,000 (Direct Cost: ¥400,000)
Fiscal Year 1990: ¥400,000 (Direct Cost: ¥400,000)
Fiscal Year 1989: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
KeywordsPGI_2産生刺激因子 / 性状 / 精製 / 線維芽細胞培養液 / 血管内皮細胞 / 糖尿病性血管障害 / 一線維芽物細胞培養液 / 血清 / プロスタサイクリン産生刺激活性 / 硫酸アンモニウム / イオン交換クロマトグラフィ- / ヘパリンクロマトグラフィ- / アンチトロンビンIII
Research Abstract

血管内皮細胞より産生されるプロスタサイクリン(PGI_2)は、強力な血管拡張作用および血小板凝集抑制作用を有する。MacintyreらはPCI_2の産生を刺激する活性が流血中に存在することを報告しているが、その本態因子はいまだ不明である。我々は、培養ウシ血管内皮細胞による生物学的測定系を用い、流血中に本活性の存在を認め、しかも本活性の低下が糖尿病性血管障碍や動脈硬化症の発症、進展に関連している成績を報告してきた。一方、近年種々の生理活性物質が細胞の培養上清より精製されている。我々は、ヒト二倍体線維芽細胞の無血清培養上清(conditroned medium CM)中にPGI_2産生刺激活性を認め、本活性因子(PGI_2 production stimulating factor PSF)の精製を行った。約50L(総蛋白量2g)のCMを濃縮し、蛋白量1mg/mlに調整した。Wators社のHPLC装置に装着したDBAEー5PW(21.5×15)、HEPARINー5PW(7.5×7.5)、PROTEINーPAK300×2の各種HPLC用columnを用い、活性分画を粗精製した。SDSーPAGE上、非還元下でPSFは31kDaの単一バンド、還元下で35、27、8kDaのバンドとして認められた。31kDa蛋白をG4 reverseーphaseHPLCで分析すると、アセトニトリル濃度28%と31%の位置に2種類の蛋白が混在していることが判明した。アミノ酸シ-クエンサ-でそれぞれのN末端アミノ酸配列を分析した。Homology検索の結果、一方はinsulinーlike growth factor(IGF)binding protein4と相同性が高いことが判明した。そこで、IGFー1に対するligandーaffinity columnを作製した。PSF活性はIGFー1 ligand affinity columnのflowーthrough分画に認められた。この分画をC4 reverseーphaseHPLCで分析すると、アセトニトリル濃度31%の位置に単一ピ-クとして認められた。従って、PSFはこの新しい蛋白と推定されている。現在分子生物学的手法を用いてPSFの構造を決定中である。

Report

(3 results)
  • 1991 Annual Research Report
  • 1990 Annual Research Report
  • 1989 Annual Research Report

Research Products

(16 results)

All Other

All Publications (16 results)

  • [Publications] Umeda F.: "Glucose reduces PDGF production and cell proliferation of cultured vascular endothelial cells" Horm.Metabol.Res.23. 274-277 (1991)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Ishii H.: "Increased intracelluar calcium mobilization in platelets from patients with type 2 (nonーinsulinーdependent) diabetes mellitus" Diabetologia. 34. 332-336 (1991)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Inoguchi T.: "Platelet stimulation for prostacyclin production in aortic endothelial cell cultures:alteration in diabetes mellitus" Horm.Metabol.Res.23. 539-544 (1991)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Ishii H.: "Increased inositol phosphate accumulation in platelets from patients with nonーinsulinーdependent diabetes mellitus" Diabetes Res.Clin.Pract.14. 21-28 (1991)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Umeda F.: "Partial purification of serum prostacyclin stimulatory activity by heparinーagarose column;abnormality detected in diabetics" Diabetes Res.Clin.Pract.(1992)

    • Related Report
      1991 Annual Research Report
  • [Publications] Umeda F.: "Vitamin E enhances prostacyclin by cultured aortic endothelial cells" J.Clin.Biochem.Nutr.8. 269-277 (1990)

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] Ishii H.: "Modification of prostaglandin synthesis in washed human platelets and cultured aortic endothelial cells by glycosylated low density lipoprotein" Diabetes Res.12. 177-182 (1990)

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] Ishii H.: "Changes in phosphoinositides turnover.calcium mobilization.and protein phosphorylation in platelets from NIDDM" Diabetes. 39. 1561-1568 (1990)

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] Inoguchi T.: "Platelet stimulates prostacyclin production by cultured aortic endothelial cells and its abnormality in diabetes mellitus" Horm.Metabol.Res.(1990)

    • Related Report
      1990 Annual Research Report
  • [Publications] Umeda F.: "Partial purification of serum prostacyclin stimulatory activity by heparinーagarose column and its abnormality in diabetics" Thromb.Haemostas.(1990)

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      1990 Annual Research Report
  • [Publications] Ono H.: "Glucose inhibits prostacyclin production by cultured aortic endothelial cells." Thrombos.Haemostas.60. 174-177 (1988)

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      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Inoguchi T.: "Abnormality in prostacyclin-stimulatory activity in sera from diabetics." Metabolism. 8. 187-192 (1989)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Yamauchi T.: "Antithrombin III stimulates prostacyclin synthesis by cultured aortic endothelial cells." B.B.R.C.163. 1404-1411 (1989)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Umeda F.: "Reduced stimulatory activity on prostacyclin production by cultured endothelial cells in serum from aged and diabetic patients." Atherosclerosis. 75. 61-66 (1989)

    • Related Report
      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Umeda F.: "Modification of prostacyclin-stimulatory activity in sera by glucose,insulin,low density lipoprotein,linoleic acid and linoleic acid hydroperoxide." Diabetes Res.Clin.Pract.8. 137-144 (1990)

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      1989 Annual Research Report
  • [Publications] Yamauchi T.: "Serum antithrombin III stimulates prostacyclin synthesis and its reduction in diabetes." Diabetes.

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      1989 Annual Research Report

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Published: 1989-03-31   Modified: 2016-04-21  

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