Orthotopic肺癌モデルの開発 PETイメ-ジングによる検証と放射線腫瘍学的特性
| Project/Area Number | 04F04602 |
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| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 外国 |
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| Research Field |
Radiation science
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| Research Institution | Yokohama City University |
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| Host Researcher |
康 芸(2006) 横浜市立大学, 医学研究科, 特任準教授
井上 登美夫
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| Foreign Research Fellow |
KANG Y.
康 芸 横浜市立大学, 医学研究科, 外国人特別研究員
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| Project Period (FY) |
2004 – 2006
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| Project Status |
Completed(Fiscal Year 2006)
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| Budget Amount *help |
¥2,400,000 (Direct Cost : ¥2,400,000)
Fiscal Year 2006 : ¥600,000 (Direct Cost : ¥600,000)
Fiscal Year 2005 : ¥1,200,000 (Direct Cost : ¥1,200,000)
Fiscal Year 2004 : ¥600,000 (Direct Cost : ¥600,000)
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| Keywords | human lung cancer / A549 cell line / SQ5 cell line / orthotopic tumor model / immunohistochemical staining / Bromodeoxyuridine / nude mouse / subcutaneous tumor model / FDG / γ-counter / SO5 cell line |
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| Research Abstract |
目的:ヌードマウスを用いたOrthotopicヒト肺癌モデルの確立、Orthotopicヒト肺癌の生物特性はとマウス皮下に形成しているヒト肺癌の生物特性と比較。
研究材料:ヒト肺腺癌A549細胞及び扁平上皮癌SQ5細胞を5%αMEM mediumで培養した。7から9週齢のBalb/cヌードマウス(チャールズリバー社)を用いた。Bromodeoxyuridine (BrdUrd), Propidium Iodide, Protease (Sigma)。マウス抗BrdUrd抗体、抗マウスFITC結合二次抗体。
研究方法:1)orthotopicヒト肺癌腫瘍及びの皮下ヒト肺癌腫瘍をそれぞれ作製し、マウスを解剖する前20分に、BrdUrd (60mg/kg)を腹腔内に注射し、肺腫瘍及び皮下腫瘍を回収した。サンプルをフォルマリンで固定し、5μmにカットし、スライドを作成にした。2)スライドをHE染色し、腫瘍の大きさ、形態や分布などを観察した。スライドを脱パラフィンと水和し、Proteaseで処理した。DNAを2Nの塩酸で処理し、ホウ酸で中和した。馬血清でブロックし、マウス抗BrdUrd抗体を結合させた。さらにFITC結合抗マウス二次抗体を結合させた。細胞核をPropidium Iodideで染色し、スライドを蛍光顕微鏡で観察した。BrdUrd陽性細胞はDNAを合成している細胞であり、増殖していると判断し、腫瘍の増殖をカウントした。
結果:HE染色したスライドでは、Orthotopic肺腫瘍は直径100μlから5mmまで大きさが様々でした。ヒト肺腺癌A549のOrthotopic腫瘍は不完全な腺組織の形態を形成し、主に肺組織の周辺に分布した。扁平上皮癌SQ5のOrthotopic腫瘍は主に末梢気管支から形成され、中心壊死が顕著でした。
Orthotopicヒト肺腫瘍ではBrdUrd陽性細胞は何箇所に集中して分布し、一視野あたり平均28個BrdUrd陽性細胞があった。皮下ヒト肺腫瘍ではBrdUrd陽性細胞は分散に分布し、一視野あたり平均22個BrdUrd陽性細胞があった。以上によりOrthotopic肺腫瘍モデルはヒト肺癌の発生及び増殖などの生理状態をより反映していることが予想される。
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Report
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Research Products
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