動原体に普遍的なタンパク質Mis12の均等染色体分配における必須機能の解明

Research Project

Project/Area Number	04J01291
Research Category	Grant-in-Aid for JSPS Fellows
Allocation Type	Single-year Grants
Section	国内
Research Field	Molecular biology
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	清光智美京都大学, 生命科学研究科, 特別研究員(DC1)
Project Period (FY)	2004 – 2006
Project Status	Completed (Fiscal Year 2006)
Budget Amount *help	¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000) Fiscal Year 2006: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000) Fiscal Year 2005: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000) Fiscal Year 2004: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywords	動原体 / Mis12複合体 / スピンドルチェックポイント / hMis12複合体 / スピンドル / cell cortex / RNAi / Bub1
Research Abstract	CENP-Aのセントロメア局在に必須な分裂酵母セントロメアタンパク質Mis18のヒトホモログhMis18の細胞内局在および、CENP-Aとの局在依存性を調べた。hMis18は分裂酵母同様、M期中期に動原体に局在せず、M期終期以降にセントロメア領域に局在することを見いだした。また、CENP-A RNAiではhMis18はセントロメアに局在したことから、ヒトhMis18がCENP-Aには依存せず局在することを示した。以上の内容はDevelopmental Cell誌に公表した。 CENP-Aとは異なる経路で動原体構築、機能に必須な動原体タンパク質hMis12について、M期に物理的に相互作用する因子を質量分析により明らかにした。c20orf172,DC8,PMF1,AF15q14,HEC1,Nuf2,Spc25,Spc24,Bub1,BubR1,Bub3のcDNAをクローニングし、yeast two hybridによりこれらのタンパク質がどのように直接相互作用しうるか検討した。Bub1,BubR1がN末保存領域にあるTPR motifを介して、AF15q14と直接相互作用することを明らかにした。またTPR motifに変異を導入したBub1,BubR1ではBub1 RNAi, BubR1 RNAiの表現型を相補できないことを明らかにした。in vivoにおいてBub1,BubR1とAF15q14の相互作用がそれらの機能発現に必要であることが示唆された。Y2Hによる相互作用MAPとRNAiを用いた局在依存性の解析からhMis12はAF15q14を介してBub1/BubR1を動原体に局在させることが示唆された。以上の内容は現在投稿準備中である。