腸管免疫に携わる分泌型IgA-免疫グロブリンの分子設計

• Project/Area Number: 05258204
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: Utsunomiya University
• Principal Investigator: 菅野 長右エ門 宇都宮大学, 農学部, 教授 (30011969); 菅野 長右ヱ門 宇都宮大学, 農学, 教授
• Project Period (FY): 1993
• Project Status: Completed(Fiscal Year 1993)
• Budget Amount: ¥1,500,000 (Direct Cost : ¥1,500,000); Fiscal Year 1993 : ¥1,500,000 (Direct Cost : ¥1,500,000)
• Keywords: 遊離分泌成分 / 分泌型IgA免疫グロブリン / キレートクロマトグラフィー / リシルエンドペプチダーゼ / N-末端アミノ酸配列 / 腸管免疫 / パイエル板細胞 / ハイブリドーマ

Research Abstract

1)遊離分泌成分(FSC)は、牛乳ホエーの55%飽和硫安沈殿画分から、キレートクロマトグラフィー(TSK gel Chelate-5PW)で2成分(SC-1およびSC-2)に分離されることを見いだした。その比率は約7〜6:3〜4であった。2成分はSDS-PAGEで単一で、移動度に差異はなく、分子量は80,000と概算された。両者のN-末端アミノ酸配列には差異はなかった。リシルエンドペプチダーゼでのペプチドマップは互いに類似していたが、それぞれに異なる1つの主要なピークが異なり、それらのアミノ酸組成は、SC-1Pはグリシンに、SC-2Pはメチオニンとシステインに富んでいた。
2)ビオチン標識したFSCとヒトミエローマIgA1二量体およびIgMポリマーとの結合試験をELIZAで測定した。ビオチン標識FSCのIgA1二量体およびIgMポリマーに対する結合はFSCの濃度の増加とともに増大し、試験した10^<-7>Mで最大に達した。またFSCはIgMとも結合することが示された。また10^<-7>Mにおいて、IgA二量体に対する結合能はSC-2の方がSC-1よりも高く、SC-1はほとんどIgA1二量体に結合しなかった(SC-2の40%)。
3)マウスBalb/cのパイエル板細胞をSP2/0ミエローマ細胞と融合することにより、IgA二量体を産生するハイブリドーマを作成している。融合後、細胞上清中のIgAをELIZAで測定し、IgA産生ハイブリドーマをスクリーニングした。さらに上清の電気泳動を行い、IgA産生の確認を行った。現在までに二回の融合を行い、20well中9well(40%)、12well中8well(60%)において、IgAの産生がみられた。