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プロテインキナーゼCによる神経伝達物質トランスポーター機能の制御機構に関する研究

Research Project

Project/Area Number 05670091
Research Category

Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General pharmacology
Research InstitutionKobe University

Principal Investigator

斎藤 尚亮  神戸大学, 医学部, 講師 (60178499)

Project Period (FY) 1993
Project Status Completed (Fiscal Year 1993)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1993: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
KeywordsプロテインキナーゼC / GABAトランスポーター / アフリカツメガエル卵母細胞 / シナプトゾーム
Research Abstract

GABAトランスポーターに対する燐酸化酵素の影響を調べるために、アフリカツメガエル卵母細胞発現系を用いた。つまり、ラット脳cDNAライブラリーより、GABAトランスポーター(GAT1)cDNAを用いてGAT1mRNAを合成、卵母細胞に注入することによってGAT1を発現させた。発現したGAT1は、Na^+、Cl^-依存性にGABAを取り込み、その取り込みはニペコチン酸によって、ほぼ完全に抑制された。これらのGAT1発現卵母細胞にプロテインキナーゼC活性化剤であるホルボールエステルを作用させたところ、GABA取り込みは有意に抑制され、その抑制はプロテインキナーゼ阻害薬であるスタウロスポリンによって阻害された。また、Eadie-Hofstee plotで解析したところ、この抑制は細胞外GABAに対する親和性(Km)を低下させることによることが示された。この燐酸化によるGABAトランスポーターの抑制が生理的にも起こりうるかを検討するために、ラット脳シナプトゾームを調整し、プロテインキナーゼCの影響を調べたところ、やはりGABAに対する親和性の低下によるGABA取り込みの抑制が認められた。さらに、GAT1特異抗体による免疫電顕の結果、GAT1は神経終末に存在していることが明らかになった。これらの結果から、神経終末において、GAT1はプロテインキナーゼCによって燐酸化され、GABAに対する親和性が低下し、取り込み抑制が起こることが示唆された。つまり、燐酸化によってGABAシナプス伝達の増強が起こることが推測された。

Report

(1 results)
  • 1993 Annual Research Report

Research Products

(5 results)

All Other

All Publications (5 results)

  • [Publications] S.Matsuyama: "γ-Aminobutyric acid(GABA)modulates neurotransmission in the sinus node via stimulation of the GABAA receptor." Am.J.Physiol.264. H1057-H1061 (1993)

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  • [Publications] N.Saito: "Cellular and intracellular localization of ε-subspecies of protein kinase C in the rat brain;Presynaptic localization the ε-subspecies." Brain Research. 607. 241-248 (1993)

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  • [Publications] K.Kumoi: "Immunohistochemical localization of γ-aminobutyric acid- and aspartate-containing neurons in the guinea pig superior olivary complex." Hearing Res.68. 173-179 (1993)

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  • [Publications] S.Tominaga: "Immunocytochemical localization of α-,βI-,βII- and γ-subspecies of protein kinase C in the motor and premotor cortex of rhesus monkey" Neurosci.Res.16. 275-286 (1993)

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  • [Publications] I.Osawa: "Phorbol ester-induced inhibition of GABA uptake by synaptosomes and by Xenopus oocyte expressing GABA transporter(GAT1)." Neurosci.Res.(in press).

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URL: 

Published: 1993-03-31   Modified: 2016-04-21  

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