Project/Area Number |
05770490
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Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Research Field |
Circulatory organs internal medicine
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Research Institution | Jikei University School of Medicine |
Principal Investigator |
田那村 彰 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (40207163)
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Project Period (FY) |
1993
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 1993)
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Budget Amount *help |
¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1993: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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Keywords | 心筋ミトコンドリアDNA / DNA多重欠失 / 糖尿病 / 心筋梗塞 / PCR |
Research Abstract |
本研究では心筋ミトコンドリアDNA異常に関して検討したものである。まず、これまでの我々のpreliminaryなdataをもう少し明らかにするため、さらに多くの剖検心を用いて検討を加えた。生前、糖尿病を有した症例、心筋梗塞を有した症例の剖検左室心筋からDNAを抽出し、ミトコンドリアDNAのD-loop領域とATPase6遺伝子の間8.4kbをはさんで合成したオリゴヌクレオチドプライマーを用いてPCR反応を行った。 PCRによる増幅反応はdenature:94°C,15秒、annealing:50°C,15秒、primer extension:72°C,80秒にて30サイクル行い増幅したDNA断片はアガロース電気泳動、エチジウムブロマイド染色後、紫外線照射によりバンドを検出した。また、ミスアニーリングの否定のため、プライマーシフトPCR法を追加した。この結果、糖尿病では7症例中5例に、心筋梗塞症例では4例前症例に、約7.4kbのミトコンドリアDNAの欠失を認めた。このことから糖尿病の代謝障害や、フリーラジカルなどの影響が推測される。 次に動物実験で検討した。Wistarラットにstreptpzptpcin(50mg/kg)静注で糖尿病を生ぜしめた。糖尿病状態で4週放置したペントバルビタール麻酔下で心臓を摘出、左室心筋DNAを抽出した。上述のヒトの部分と同一部位に関してプライマーを作成し、PCR法にて心筋ミトコンドリアDNA断片を増幅した。このようにして検討した部分にはDNAの欠失を認めなかったが、この理由として、種による違いを含めた方法的問題の他に糖尿秒の程度や期間などの影響も考えられる。
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Report
(1 results)
Research Products
(1 results)