コイ補体第3成分の遺伝的多形解析

Research Project

Project/Area Number	08660252
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Section	一般
Research Field	Fisheries chemistry
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	矢野友紀九州大学, 農学部, 教授 (90038266)
Project Period (FY)	1996
Project Status	Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help	¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000) Fiscal Year 1996: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Keywords	魚類 / コイ / 免疫学 / 補体 / C3 / 多形 / cDNAクローニング / RT-PCR
Research Abstract	これまでに演者らはコイ補体C3のcDNAを3クローン単離したが、本研究ではRT-PCRを用いてこれら以外の変異C3を検索し、コイにおけるC3の多形性を検討した。C3のα鎖の中央付近に存在するチオールエステル部位のアミノ酸配列を基にセンスプライマー(P1)を合成した。一方、チオールエステル部位から約130および200アミノ酸残基C末端側に存在する、良く保存されたアミノ酸配列(VIAMQEAおよびWTVPGQH)を基にアンチセンスプライマー(P2,P3)を合成した。コイ肝膵臓cDNAライブラリーを鋳型としたPCRによってP1-P2間、P1-P3間を増幅し、塩基配列を決定した。プライマーの設計に用いたアミノ酸配列から予測されたように、P1-P2およびP1-P3を用いたPCRによってそれぞれ433bpと649bpのDNA断片が増幅された。両断片をpBluescriptII SK(-)ベクターにサブクローニングし、無作為に選んだ44クローンから制限酵素マッピングによって選別した32クローンの塩基配列を解析したところ、8種類の配列にグループ分けできた。最近、C3と同じくチオールエステルを持つ補体成分であるヒトC4を用いた解析によって、C4の1106番目のアミノ酸残基(His/Asp)が約100残基離れたチオールエステルの反応速度(すなわち異物に対する結合能)の高低を支配していることが判明したが(Dodds et al.,Nature,379,177-179,1996)、コイC3ではこの部位に相当するアミノ酸としてHis,Ser,Glnの3種が認められた。以上の結果から、コイには異物に対する結合能が異なる、少なくとも8種のC3が存在することが推測された。