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骨芽細胞におけるPTHrP産生とビタミンDによる調節

Research Project

Project/Area Number 08671203
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Section一般
Research Field 内分泌・代謝学
Research InstitutionResearch Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health

Principal Investigator

大薗 恵一  大阪府立母子保健総合医療センター, 研究所・環境影響部門, 部長 (20270770)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 中島 滋郎  大阪府立母子保健総合医療センター研究所, 環境影響部門, 主任研究員 (30270771)
Project Period (FY) 1996
Project Status Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help
¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 1996: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
KeywordsビタミンD / 副甲状腺関連蛋白 / 骨芽細胞 / 転写抑制 / ビタミンD応答配列 / 悪性腫瘍 / 高カルシウム血症 / プロモーター活性
Research Abstract

ヒト骨肉腫由来骨芽細胞様株細胞Saos-2細胞より軟寒天培養法を用いて副甲状腺ホルモン関連蛋白(PTHrP)を高産生するクローンを6コ得た。このうち、安定してPTHrPを高産生するクローンをE5と名付け、実験を行い以下の結論を得た。
1.細胞数を測定して増殖曲線を作製し、Saos-2細胞とE5細胞間に差のないことを認めた。
2.培養上清中のPTHrPをIRMA法で測定し、E5細胞はSaos-2細胞より約4.6倍高濃度のPTHrPを産生していることを確認した。
3.E5細胞においてPTHrP産生は、対数増殖期(培養10日まで)には増加し(2.4倍)、その後減少した(0.24倍)。
4.PTHrPの産生は10-8M1,25(OH)2D3添加により、増加する傾向が見られ、14及び17日目において有意に増加した(1.9倍,3.2倍)。
5.本細胞におけるPTH/PTHrP受容体の発現をRT-PCRにて確認した。
6.10-8M1,25(OH)2D3添加により、ビタミンD応答配列(VDRE)を用いたレポーター活性が2.6倍に高められ、ビタミンD受容体(VDR)発現ベクターの導入により5.9倍に誘導された。Saos-2細胞では、それぞれ、4.7倍、5.9倍であった。
7.ヒトPTHrP遺伝子プロモーター上のputative negative VDRE(GGGTGAggaaGGGTGT)の機能を検討したところ、Saos-2細胞において抑制反応は見られなかった。
一般に、活性型ビタミンDはnegative VDREを介して、PTHrPの産生を抑制すると考えられ、実際、ラットにおいてPTHrP遺伝子のnegative VDREが報告されている。しかし、ラット胎児長管骨において、ビタミンDによりPTHrP分泌が上昇したとの報告もあり、ビタミンDとPTHrP産生についてはさらに検討する必要がある。

Report

(1 results)
  • 1996 Annual Research Report
  • Research Products

    (2 results)

All Other

All Publications (2 results)

  • [Publications] 幸田徳二、柳原格、山形雅代、清水千佳、中島滋郎、大薗恵一: "ヒト骨肉腫由来細胞株(Saos-2 cell)における副甲状腺ホルモン関連蛋白産生の解析" 小児代謝性骨疾患研究会報告書. (in press).

    • Related Report
      1996 Annual Research Report
  • [Publications] K.Ozono,M.Yamagata,C.Shimizu,T.Koda,I.Yanagihara,S.Nakajima: "AF-2 region is not critical for the vitamin D receptor to suppress the transcription via nVDRE in chick PTH and human PTHrP gene." Abstract of lst Cancer-Induced Bone Diseases. (in press).

    • Related Report
      1996 Annual Research Report

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Published: 1996-04-01   Modified: 2016-04-21  

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