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腎上皮細胞におけるNa/H交換輸送体の局在に関する研究

Research Project

Project/Area Number 08770875
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Kidney internal medicine
Research InstitutionJapanese Foundation For Cancer Research

Principal Investigator

花井 順一  財団法人癌研究會, 癌研究所・生化学部, 研究員 (70261964)

Project Period (FY) 1996
Project Status Completed (Fiscal Year 1996)
Budget Amount *help
¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1996: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywords腎尿細管 / ターゲッテング機構 / 極性 / ナトリウム / 水素イオン交換輸送蛋白 / LLC-PK1細胞 / antisense oligonucleotide / PCRクローニング / アミロライド
Research Abstract

腎尿細管における輸送担体のターゲッテング機構を解明するために、輸送担体としてナトリウム/水素イオン交換輸送蛋白(Na/H exchanger : NHE)を、モデル上皮としてLLC-PK1 細胞を用いて、NHEのアイソフォーム(NHE-1,NHE-3)の上皮細胞における局在を分子生物学的手法により解析した。
1。透過性のあるフィルター膜上にLLC-PK1細胞をconfluentに培養し、上皮側、基底側それぞれのNa^+依存性の細胞内pH上昇(NHE活性)を、HCO_3^-のない条件で測定した。この結果LLC-PK1細胞においては上皮側、基底膜側にアミロライドに対する感受性が異なるNHE活性が存在することが判明した。
2。上皮側にNHE-1が混入している可能性を明らかにする目的でLLC-PK1細胞のNHE-1 mRNAに対するantisense oligonucleotideを用いて、上皮側、基底膜側のNHE活性の抑制を検討した。NHE-1 cDNAの5'末端の配列に対するantisenseを用いると基底膜側のNHE活性のみが抑制されることが判明した。以上からLLC-PK1細胞においてはNHE-1は基底膜側にのみ分布しているものと考えられた。この事実はJournal of Cellular Physiology誌に発表した(in press)。
3。すでにクローニングされているラットとラビットのNHE-3に共通して保存されている部分をprimerとしてLLC-PK1細胞のNHE-3 cDNAのPCRクローニングしている。得られたNHE-3 cDNA cloneを、作成したNHE欠損fibroblastに発現させ機能を検討し、また得られたcDNA cloneに対するantisenseを作成し、上記と同様の機能抑制の有無からNHE-3のLLC-PK1細胞における分布を確認している。

Report

(1 results)
  • 1996 Annual Research Report

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

  • [Publications] Jun-ichi Hanai,et al.: "Na^+/H^+ exchanger (NHE) in the basolaterol membrane is encodecl by NHE-1mRNA in LLC-PK1 clone 4 cells." Journal of Cellular Physiology. (in press). (1997)

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  • [Publications] 山田秀生.花井順一他: "薬剤性腎障害" 臨床医. 22. 1510-1511 (1996)

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  • [Publications] 吉村まどか.花井順一他: "Ca受容体" 内科. 77. 1161-1162 (1996)

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  • [Publications] 花井順一: "横紋筋融解症…その成因と治療…" 綜合臨床. 45. 1661-1662 (1996)

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  • [Publications] 石橋由孝.花井順一他: "血液pH調節糸の基本とその障害" Medical Practice. 13. 1500-1504 (1996)

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  • [Publications] 花井順一.奥田俊洋他: "腎・電解質系疾患の遺伝子学" 最新医学. 51. 1954-1978 (1996)

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  • [Publications] J.HANAI.et al: "Inhibin Activin,Follistatin.Recent Advances and Future views" Springer-Verlag,New York (in press), (1997)

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  • [Publications] 池田祐一.花井順一: "溶血性尿毒症性症候群,ハイパー臨床内科" 中山書店 (in press), (1997)

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Published: 1996-03-31   Modified: 2016-04-21  

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