オートファジー関連蛋白質Atg8-PE結合体の構造解析と機能解析
Project/Area Number |
08J00971
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Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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Allocation Type | Single-year Grants |
Section | 国内 |
Research Field |
Biological pharmacy
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Research Institution | Hokkaido University |
Principal Investigator |
山口 雅也 北海道大学, 大学院・生命科学院, 特別研究員(DC1)
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Project Period (FY) |
2008 – 2010
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2010)
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Budget Amount *help |
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2010: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2009: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2008: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
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Keywords | オートファジー / Atg8-PE結合体 / Atg3 / Atg3-Atg8相互作用 / Atg8-family interacting motif / 転位交差飽和法 / 選択的オートファジー / オートファゴソーム / 界面活性剤 / タンパク質濃度の最適化 / 精製系の確立 / 可溶化 / Deoxycholate Na / Lauroyl Sarcosine Na / NMR法 |
Research Abstract |
タンパク質分解経路の一つであるオートファジーにおいて、Atg8-phosphatidylethanolamine (PE)結合体はオートファゴソーム形成に関わる重要な因子である。本研究ではAtg8-PE結合体の構造解析を目指し、オートファゴソーム形成機構の謎を明らかにすることを目的としている。 当該年度は昨年度に引き続き難航していたAtg8-PE結合体の結晶化に取り組んだ。昨年度約91%の純度でAtg8-PE結合体を精製することができ、各種結晶化スクリーニングKitを用いて結晶化スクリーニングを行っているが、現在のところAtg8-PE結合体の結晶を得るには至っていない。 Atg8-PE結合体はAtg3の働きによりAtg8をPEへ結合させて作られる。そこで、Atg3-Atg8相互作用に着目し、NMR法を用いてAtg3-Atg8相互作用の詳細な相互作用様式の解析を行い、その生物学的意義の解析を行った。Atg8はWXXL配列というAtg8-family interacting motif (AIM)を特異的に認識することが報告されており、Atg3にも270番目から273番目にTrp-Glu-Asp-Leuという配列が酵母間で良く保存されていた。このとから、このAtg3は領域を介してAtg8と相互作用していると予測し、NMR法を用いた滴定実験及び転位交差飽和法を用いてAtg3はAIMを介してAtg8と相互作用していることを示した。さらにin vitro, in vivoにおける解析を行い、Atg3-Atg8相互作用は酵母における選択的オートファジーにとって重要であることを示した。
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Report
(3 results)
Research Products
(4 results)