カルシウム依存性プロテインキナーゼIIによるサイトカイン遺伝子の制御機構

Research Project

Project/Area Number	09770325
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	内科学一般
Research Institution	St. Marianna University School of Medicine (1998) Keio University (1997)
Principal Investigator	浜信昭聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (70228526)
Project Period (FY)	1997 – 1998
Project Status	Completed (Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help	¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000) Fiscal Year 1998: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000) Fiscal Year 1997: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Keywords	カルシウム依存性プロテインキナーゼII / インターロイキン4 / 遺伝子転写 / カルシウム依存性プロテインキナーゼ / AP-1
Research Abstract	【目的】液性免疫を補助するtype2サイトカインであるirterleukin 4(IL-4)の遺伝子転写制御機構は不明な部分が多い.特に,Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(CaM KII)の転写調節における役割は不明である.本研究では,遺伝子導入とCATアッセイの手法を用い,IL-4プロモーターとCaM KII発現ベクターをJurkat細胞に同時導入し,CaM KIIのIL-4プロモーター活性に対する影響を検討することを目的とした. 【方法】pSVOCATレポーター遺伝子にc-mos遺伝子のupstream配列を挿入し,プラスミドpUNSP_Lを作成した.このNotL認識部位にヒトIL-4プロモーター(-418より+50bp)をクローニングしレポーターコンストラクトIL-4CATを作製した。 IL-4CATをJurkat細胞(CaM KII)遺伝子導入群とベクターのみ導入した群)に遺伝子導入し,24時間後,Ca^<2+>イオノフォアionomycinでさらに16時間刺激後,CAT活性を測定し,CaMKIIのIL-4プロモター活性に対する影響を検討した。【結果】IL-4プロモーターはionomycinの単独刺激で活性化した.CaMKIIの同時導入によりこの転写活性は40%低下した.また,IL-4プロモーターはCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインホスファターゼであるcalcineurinの遺伝子導入によっても著しい転写活性上昇を示した.Calcineurinによって誘導されたIL-4の転写活性も同様にCaMKIIlによって約40%抑制された.本研究によりCaMKIIのIL-4プロモーター活性化における抑制作用が明らかとなった.