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動物細胞を用いた新規完全ヒト抗体ディスプレイ法の開発

Research Project

Project/Area Number09J01321
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Applied molecular and cellular biology
Research InstitutionKyushu University
Research Fellow 富松 航佑  九州大学, 大学院・農学研究院, 特別研究員(PD)
Project Period (FY) 2009 – 2010
Project Status Completed(Fiscal Year 2010)
Budget Amount *help
¥1,400,000 (Direct Cost : ¥1,400,000)
Fiscal Year 2010 : ¥700,000 (Direct Cost : ¥700,000)
Fiscal Year 2009 : ¥700,000 (Direct Cost : ¥700,000)
Keywordsヒトモノクローナル抗体 / CHO細胞 / ディスプレイ法 / 組換えタンパク質生産 / 動物細胞ディスプレイ法 / 抗体生産
Research Abstract

前年度において、動物細胞ディスプレイ法の基盤を構築した。本年度においては構築した新しい手法を用いる事でヒトモノクローナル抗体を取得が可能であるかということを試験した。そこでヒトモノクローナル抗体の親和性成熟試験を行った。所属機関において作製された抗ヒト高親和性IgE受容体(FcεRIα)のモノクローナル抗体の遺伝子を用い、H鎖CDR3にPCR法でランダムに変異を導入した。その後構築された動物細胞ディスプレイ用ベクターにライゲーションを行った。このベクターをCHO FlpIn細胞にFlpInシステムを用いてトランスフェクションをする事で、10の6乗の独立したクローンからなる動物細胞ディスプレイライブラリーを作製した。このライブラリーにFITC標識をしたFcεRIαを反応させ、結合性の高いクローンに関してセルソーティングによって分離を行った。ソートした細胞は、その発現する抗体の抗原への結合親和性をELISAによって測定した結果、変異を導入する前の親抗体よりも抗原に対する反応性が高くなったクローンが多数取得された。取得された細胞にCre/loxP組換えを起こさせる事で抗体を膜型から分泌型へ変換し、モノクローナル抗体を取得した。取得された抗体は特異性をEHSAにて試験を行った。その結果FcεRIαに対しては反応性を示したものの、他の抗原(IgE,BSA)に関しては反応を示さなかった。これらの結果から新たに開発された動物細胞ディスプレイ法を用いてヒトモノクローナル抗体を単離することが可能である事が示された。

Report

(2results)
  • 2010 Annual Research Report
  • 2009 Annual Research Report

Research Products

(3results)

All 2010

All Presentation Patent(Industrial Property Rights)

  • [Presentation] Animal Cell Display Method : Construction of a new method to produce human monoclonal antibodies.2010

    • Author(s)
      富松航佑
    • Organizer
      JAACT
    • Place of Presentation
      札幌
    • Year and Date
      2010-09-03
    • Related Report
      2010 Annual Research Report
  • [Presentation] 動物細胞ディスプレイ法を用いたヒトモノクローナル抗体作製系の開発2010

    • Author(s)
      富松航佑
    • Organizer
      日本農芸化学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2010-03-29
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Patent(Industrial Property Rights)] 動物細胞ディスプレイ法およびそれを利用した完全ヒトモノクローナル抗体の体外成熟法2010

    • Inventor(s)
      白畑實隆, 富松航佑, 樺山繁
    • Industrial Property Rights Holder
      九州大学
    • Filing Date
      2010-03-04
    • Application Year
      2010
    • Related Report
      2009 Annual Research Report

URL :

Published : 2009-04-01   Modified : 2016-04-21  

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