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シングルチューブPCRを用いたキャピラリー電気泳動によるY染色体上のSTR型検出

Research Project

Project/Area Number10877339
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 矯正・小児・社会系歯学
Research InstitutionNihon University

Principal Investigator

堤 博文  日本大学, 歯学部, 助手 (30188594)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 小室 歳信  日本大学, 歯学部, 助教授 (50139200)
向山 レイ  日本大学, 歯学部, 講師 (40059902)
Project Period (FY) 1998
Project Status Completed(Fiscal Year 1998)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost : ¥2,000,000)
Fiscal Year 1998 : ¥2,000,000 (Direct Cost : ¥2,000,000)
Keywords歯科法医学 / キャピラリー電気泳動法 / Y染色体 / DYS389 / DYS390 / multiplex PCR / 歯髄
Research Abstract

歯科診療時に採取した新鮮歯髄および1〜23年間室内に保存された歯から採取した陳旧歯髄を試料とし,シングルチューブPCRキットを用いてDNA抽出からPCR増幅までを行った後,ジェネティックアナライザABI PRISM^<TM>310を用いたキャピラリー電気泳動法(CGE)によるY染色体上のマイクロサテライトDYS389およびDYS390ローカスの型検査について検討した。
DYS389ローカスについては,Kayserらが報告しているプライマーを用いてDNA増幅し,検討したところ,DNAサイズの異なる2つのPCR産物が得られることから,フォワード側からの塩基配列を知ることは困難であった。そこで,1つのPCR産物が得られるようプライマーを新たに設定したところ,塩基配列を正しく知ることができ,個人識別は可能であった。また,DYS389およびDYS390ローカスそれぞれのフォワード側に蛍光標識をつけたプライマーを用いてmonoplex PCR法によりDNAを増幅し,CGEにより検討したところ,DYS389ローカスでは17分前後に,DYS390ローカスでは16分前後にピークが認められ,かつ,それぞれ同時に泳動したサイズマーカーのピークと比較することによって型判定は可能であった。
つぎに,CGEへ応用する際のDYS389およびDYS390ローカスのmultiplex PCR条件を検討したところ,monoplex PCRにおけるアニーリング温度を58゚Cから55゚Cに変更して行うことにより,両ローカスいずれもmonoplex PCR法で得られたDNA型と一致した。
さらに,常染色体上のマイクロサテライト13ローカスについてmultiplex PCR法によりDNAを増幅し,CGEによる型検査を行ったところ,同時に泳動したラダーマーカーのピークと比較することによって型判定は可能であった。

Report

(1results)
  • 1998 Annual Research Report

Research Products

(2results)

All Other

All Publications

  • [Publications] 堤 博文: "Single-TubePCRキットを用いた唾液からのY染色体上のSTR型検査" DNA多型Vol.6 DNA多型のさらなる展開. 6. 64-67 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] 小室歳信: "DYS389ローカスのリピート構造の検討" 日本法医学雑誌. 52・4. 227-232 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report

URL :

Published : 1998-04-01   Modified : 2016-04-21  

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