| Project/Area Number |
11J08985
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Section | 国内 |
|---|
| Research Field |
Parasitology (including Sanitary zoology)
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
小林 郷介 東京大学, 医科学研究所, 助教
|
|---|
| Project Period (FY) |
2011 – 2013
|
| Project Status |
Declined (Fiscal Year 2012)
|
| Budget Amount *help |
¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Fiscal Year 2012: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2011: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
|
|---|
| Keywords | 造血幹細胞 / 熱帯熱マラリア原虫 / ウイルスベクター / 赤血球表面分子 |
|---|
| Research Abstract |
昨年度までにin vitroにおいて、ヒト造血幹細胞から成熟赤血球を作製することに成功したが、分化誘導効率に問題があった。また、単球系細胞の分化が認められ、マラリア原虫の貧食が認められたため、マラリア原虫の感染実験に供するには、さらに高純度の成熟赤血球分化が求められていた。
ヒトに特異的に感染する熱帯熱マラリア原虫は、マウスの赤血球に、ヒトの赤血球よりも1/5程度低い効率で「侵入」するが、その後の「発育・成熟」段階で死滅する。したがって、「侵入レセプター」の解析に焦点を絞れば、マウスの赤血球を用いることが可能である。そこで今年度は、マウスより採取した骨髄由来造血幹細胞にレンチウイルスベクターを用いて、ex vivoでマラリア原虫の受容体(glycophorin A, glycophorin B, glycophorin C, basigin, complement receptor 1など)を導入し、それを骨髄破壊ドナーマウスに移植することで、高収量、高効率の遺伝子組換えマウス赤血球を作製し、ヒトマラリア原虫の感染実験を行うことを目指した。
明確に上記ヒト赤血球表面分子のみを認識し、マウスのそれを認識しないモノクローナル抗体を文献から検索し、該当するものを購入あるいは分与依頼した。該当するものが見つからなかったものに関しては、候補抗体を複数入手し検討することとした。
上記遺伝子組換え実験及び、動物実験の申請し、承認を得ることができた。
実験の承認を待って、遺伝子導入用のレンチウイルスベクターを入手し、glycophorin Aなどのヒト由来赤血球膜表面分子の発現ベクターを作製した。作製したものは培養細胞での発現を検討したが、いくつかの分子は発現が認められなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
昨年海外の研究グループから、当初の研究計画と極めて類似した報告がなされた(Bei et al. 2010 J.Infect. Dis.)ため、研究計画の大幅な変更を余儀なくされた。そのための準備で今年度のほとんどの時間を費やすこととなった。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後は、作製したレンチウイルスベクターをマウス骨髄より分離した造血幹細胞に感染させ、骨髄破壊したドナーマウスへの移植により末梢血中に生じた遺伝子組換え赤血球をFACSやMACSにより濃縮し、マラリア原虫感染効率を検討する。
|
