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エチレン受容体タンパク質の分解調節機構解明とその応用に関する研究

Research Project

Project/Area Number 11J40033
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Horticulture/Landscape architecture
Research InstitutionUniversity of Tsukuba
Research Fellow 棚瀬 京子 (日和佐 京子)  筑波大学, 生命環境系, 特別研究員(RPD)
Project Period (FY) 2011 – 2013
Project Status Completed (Fiscal Year 2013)
Budget Amount *help
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2013: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2012: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2011: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Keywordsエチレン受容体 / メロン / 1-MCP / 果実成熟 / 組換え体 / 抗体 / 定量的PCR解析
Research Abstract

エチレン受容体の分解機構解明に関わる実験には、保持しているエチレン受容体タンパク質の抗体に特異性があることが重要である。しかし、既存の抗体では特異性を砲認できなかった。既存の抗体は古いものでは10年以上のものもあるため、抗体の状態が悪くなっていることも考慮された。そこで、新しくペプチド抗体を外注した。続いて、大腸菌に3種のメロンエチレン受容体タンパク質を発現させ、これを使って新しい抗体の特異性を確認することを試みた。しかし、pQE30Xaへの導入コンストラクトでは、受容体タンパク質が発現しなかった。先行研究で、大腸菌発現ベクターであるpET32aにエチレン受容体遺伝子を導入した場合では、タンパク質の発現に成功した例があり、現在はこのベクターのコンストラクトを作成中である。また、実験4で作出したメロンのエチレン受容体を発現しているトマトの葉、および実生から膜タンパク質を抽出し、抗体の特異性の確認に使用することを試みた。しかし、このウエスタンによる結果は不十分な結果に終わっている。ただし、膜タンパク質のマーカーであるHSC70の抗体を使ったウエスタンでは、目的サイズのバンドが確認できており、膜タンパク質の抽出は問題ないことが確認できている。
また、エチレン受容体の分解に関わると推定される配列の受容体分解への関与を調べる研究(実験4)では、昨年度作出したメロンのアミノ酸置換導入エチレン受容体を導入したトマトの遺伝子の発現をリアルタイムPCRで確認した。現在は、導入遺伝子シングルコピーのT_1個体の栽培を行っており、開花からBreaker(催色期)まで、およびBreakerからRed(赤熟期)までの果実成熟日数の調査を実施している。また、葉の老化や花持ちおよび形態的な変化についても観察を行っているが、これらについては顕著な変化は見られていない。

Strategy for Future Research Activity

(抄録なし)

Report

(3 results)
  • 2013 Annual Research Report
  • 2012 Annual Research Report
  • 2011 Annual Research Report

Research Products

(11 results)

All 2013 2012 2011

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 6 results) Presentation (4 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] An E8 promoter-HSP terminator cassette promotes the high-level accum ulation of recombinant protein predominantly in tranegenic tomato fruits : a case study of miraculin.2013

    • Author(s)
      Natsuko Kurokawa, Tadayoshi Hirai, Mariko Takayama, Kyoko Hiwasa-Tanase, Hiroshi Ezura
    • Journal Title

      Plant Cell Report

      Volume: 32 Pages: 529-536

    • DOI

      10.1007/s00299-013-1384-7

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Novel promoters that induce specific transgene expression during thegreen to ripening stages of tomato fi・uit development.2012

    • Author(s)
      Hiwasa・Tanase K, Kuroda H, Hirai T, Aoki K, Takane K, Ezura H
    • Journal Title

      Plant Cell Reports

      Volume: 31 Pages: 1415-1424

    • DOI

      10.1007/s00299-012-1257-5

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] From miracle fruit to transgenic tomato : Mass-production of the taste-modifying protein miraculin in transgenic plants2012

    • Author(s)
      Hiwasa-Tanase K, Hirai T, Kato K, Duhita N, Ezura H
    • Journal Title

      Plant Cell Reports

      Volume: 31 Pages: 513-525

    • DOI

      10.1007/s00299-011-1197-5

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The HSP terminator of Arabidopsis thaliana induces extremely high-level accumulation of miraculin protein in transgenic tomato2011

    • Author(s)
      Hirai T, Kurokawa N, Duhita N, Hiwasa-Tanase K, Kato K, Ezura H
    • Journal Title

      Journal of Agricultural and Food Chemistry

      Volume: 59 Pages: 9942-9949

    • DOI

      10.1021/jf100414v

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cultivation under salt stress increases the concentration of recombinant miraculin in transgenic tomato fruit, resulting in an increase in purification efficiency2011

    • Author(s)
      Hirai T, Duhita N, Hiwasa-Tanase K, Ezura H
    • Journal Title

      Plant Biotechnology

      Volume: 28 Issue: 4 Pages: 387-392

    • DOI

      10.5511/plantbiotechnology.11.0726a

    • NAID

      10029707341

    • ISSN
      1342-4580, 1347-6114
    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A trial of production of the plant-derived high-value recombinant protein in plant factory : Photosynthetic photon fluxes affect the accumulation of recombinant miraculin in transgenic tomato fruits2011

    • Author(s)
      Kato K, Maruyama S, Hirai T, Hiwasa-Tanase K, Mizoguchi T, Goto E, Ezura H
    • Journal Title

      Plant Signaling and Behavior

      Volume: 6 Pages: 1172-1179

    • DOI

      10.4161/psb.6.8.16373

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] メロン日持ち性関連遺伝子の一塩基多型2013

    • Author(s)
      柴田睦子、棚瀬(日和佐)京子、有泉亨、江面浩
    • Organizer
      日本育種学会
    • Place of Presentation
      鹿児島大学
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Single nucleotide polymorphism in genes accounting for ethylenebiosynthesis and perception in melon and its possible involvements in fruitnpenmg2012

    • Author(s)
      Shibata C, Hiwasa・Tanase K, Ariizumi T, Ezura H
    • Organizer
      Xth EUCARPIA International Meeting on Cucurbitacea 2012
    • Place of Presentation
      アンタルヤ(トルコ)
    • Year and Date
      2012-10-18
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Characterization of gene expression and protein accumulation in melonethylene receptors.2012

    • Author(s)
      Hiwasa-Tanase K, Shibata C, Ariizumi T, Ezura H
    • Organizer
      Xth EUCARPIA International Meeting on Cucurbitacea 2012
    • Place of Presentation
      アンタルヤ(トルコ)
    • Year and Date
      2012-10-15
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] コトランスフォーメーション法を利用した選抜マーカーフリーミラクリン発現トマトの作出2011

    • Author(s)
      棚瀬(日和佐)京子
    • Organizer
      日本植物細胞分子生物学会
    • Place of Presentation
      九州大学(福岡)
    • Year and Date
      2011-09-08
    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Book] 「植物工場生産システムと流通技術の最前線」第4章 遺伝子組換え用植物工場による有用成分生産 の 第2節 植物工場システムによる遺伝子組換えトマトを利用した機能性成分の生産技術 を執筆2013

    • Author(s)
      棚瀬(日和佐)京子、江面浩
    • Publisher
      株式会社エヌ・ティー・エス
    • Related Report
      2013 Annual Research Report

URL: 

Published: 2011-12-11   Modified: 2016-04-21  

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