発達過程の生殖細胞におけるp51(別名p63)の機能と制御機構の解析
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11J40093
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| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 国内 |
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| Research Field |
Developmental biology
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| Research Institution | Tohoku University |
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| Research Fellow |
藤村 維子 東北大学, 国際高等研究教育機構, 助教
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| Project Period (FY) |
2011 – 2012
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| Project Status |
Declined (Fiscal Year 2012)
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| Budget Amount *help |
¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Fiscal Year 2012: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2011: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
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| Keywords | 始原生殖細胞 / p51/p63 / p53関連遺伝子 / ES細胞 / mouse vasa homolog / アイソフォーム / 分化 / p63/p51 / p53ファミリー / 分化誘導 / 生殖幹細胞 |
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| Research Abstract |
p63は癌抑制遺伝子であるp53ファミリーのメンバーの一つである。p53がほぼ全ての細胞で機能しているのに対しp63は皮膚や四肢などでの組織特異的な機能が知られている。p63には機能の異なる複数のisoformが存在し、皮膚の組織ではこれらisoformのバランスが上皮幹細胞の分化や生死を制御する。p63はマウス胚の生殖細胞にも発生過程早期から選択的に発現していることから、生殖細胞でも一部のisoformが幹細胞で機能し、分化の制御に関与していることも予想されるが詳細は不明である。そこで本研究では、p63 isoformが発達過程の未分化な生殖細胞の分化や生死の制御に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。
分化誘導系には、mouse vasa homolog-venus(又はRFP)の蛍光で始原生殖細胞(PGC)の分化をモニターできるES細胞を利用し、Max遺伝子のノックダウンによる後期PGC様細胞(PGCLC)誘導法、EpiLCを介した前期PGCLC誘導法、の2種類を用いた。分化誘導時に、各isoformの過剰発現およびshRNAなどを用いた機能阻害を行い、vasa陽性細胞の形成および分化マーカー遺伝子群の発現を解析した。その結果、いずれの分化誘導法においても仏タイプのp63の発現はPGC形成に抑制的に働くことが示唆され、p63 isoformはPGCLCの分化や増殖を制御する可能性が示された。一方、自然発生的な細胞死および薬剤投与によるDNA損傷により誘導される細胞死についてp63 isoformの影響を解析した結果、p63によるPGCLC細胞死への影響は認められなかった。
これらの結果より、p63 isoformは発達過程の生殖細胞でも一部のisoformが幹細胞で機能し、分化や増殖の制御を担っている可能性が示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度の大きな目的はPGCLCの分化誘導培養法を用いて、shおよびsiRNA、発現ベクターによりp63 isoformの発現を調節し、p63機能解析を行ない、さらに下流分子メカニズムを探索することにあった。PGCLCの形成率、および分化マーカー遺伝子発現の解析、アポトーシスの解析によって、各種isoformの発現調節がPGCLCの形成、分化および細胞死に与える機能を明らかにできたが、予定していた下流候補因子の関連性の検討については、今後の検討事項である。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在は、p63が後期PGCの形成に与える効果を引き起こす要因について、細胞死、細胞増殖、未分化性維持、分化などの観点からより詳細な解析を進めており、p63の機能に関わる下流および上流の分子メカニズムについて解析を進めることを計画している。また、同様の機能解析を精原幹細胞に適応することも準備中である。これらより、未分化な個々の生殖細胞における、生死、分化、増殖、腫瘍形成のp63を中心とした制御ネットワーク全体について明らかとしていく計画である。
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Report
(2 results)
Research Products
(2 results)
