HIVアクセサリー遺伝子VPRによる細胞周期異常とHIV-LTR活性
| Project/Area Number |
12035230
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | Research Institute, International Medical Center of Japan |
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Principal Investigator |
志村 まり 国立国際医療センター研究所, 難治性疾患研究部, 室長 (90226267)
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| Project Period (FY) |
2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000)
Fiscal Year 2000: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000)
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| Keywords | HIV / アクセサリー遺伝子VPR / 細胞周期異常 / HIV-LTR活性 / 抗HIV治療薬 / フラボノイド |
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| Research Abstract |
1)細胞株の樹立-VPR発現調節可能な細胞株MIT-23-
テトラサイクリン反応性プロモーターによる遺伝子発現系を用いて、VPRの機能を自由に調節できる細胞株(以下MIT-23)を樹立した。
2)細胞周期異常とHIV-LTR
MIT-23にHIV-LTR Enhanced Green Fluorescence Protein(EGFP)遺伝子を導入し、HLEG-29を得た。HLEG-29は、DOX添加によるVPRの発現が誘導され、MIT-23同様の細胞周期異常と共に、HIV-LTR下流のEGFP発現増大が認められる。VPRの発現していない細胞で、Nocodazol同調後の4Nの細胞集積では、EGFPの発現が認められないことにより、HIV-LTRプロモーターにVPRが作用したことが示唆される。興味深いことに、VPRの発現したHLEG-29のDNA量(2N,4N,8N)ごとにEGFP強度を分析すると、2Nより4N/8Nの細胞集団でより高いEGFPの発現が認められた。これらは、単にDNA量ではなく、VPRによりDNA量の増大した細胞集団にHIV-LTR活性を上昇させる因子が存在していることを示唆する。
3)VPRよるHIV-LTR活性を上昇させる因子の解明
これまでに、VPRによりDNA量の増大した細胞集団では、NF-kBの発現増大とNF-kBの核内移行が認められた。今後の課題として、VPR発現に伴うNF-kBの核内移行のメカニズムを明らかにする。
4)新規化合物のスクリーニング
フラボノイド28種の生薬および2種のフラボノイドについて、MIT-23細胞を用いてVPRの機能に対する作用を解析した。その結果、5μMケルセチン(QCT)の添加により、VPR発現により誘発される細胞の4N及び8Nでの貯留が、約50%抑制された。さらにHLEG-29細胞を用いた実験より、ケルセチンは抗HIV-LTR作用があることが明らかになった。
HIV-LTR活性を上昇するメカニズムの解明は、新しい抗HIV治療薬の開発にも有用と思われる。
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Report
(1 results)
Research Products
(6 results)
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[Publications] Shimura,M.,Okuma,E.,Yuo,A.,Hatake,K.,Takaku,F.,Ishizaka,Y.: "Oxidative stress involved in room temperature induced apoptosis of HL-60 cells."J.Leukoc.Biol.. 68. 87-96 (2000)
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[Publications] Yano,R.,Shimura,M.,Taniguchi,M.,Hayashi,Y.,Suzuki,T..,Hatake,K.,Takaku,F., and Ishizaka,Y.: "Improved gene transfer to neuroblastoma cells by a monoclonal antibody targeting RET, a receptor tyrosine kinase."Human Gene Therapy. 11. 995-1004 (2000)
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[Publications] Okuma,E.,Saeki,K.,Shimura,M.,Ishizaka,Y.,Yasugi,E.,and Yuo,A.: "Induction of apoptosis in human hematopoietic U937 cells by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor : possible existence of caspase-3 like pathway."Leukemia. 14. 612-619, (2000)
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