レトロウイルス発現系を用いた遺伝子導入による大腸異常陰窩巣の分子生物学的解析
| Project/Area Number |
12770121
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Experimental pathology
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
塚本 徹哉 愛知県がんセンター, 腫瘍病理学部, 主任研究員 (00236861)
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| Project Period (FY) |
2000 – 2001
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2001)
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| Budget Amount *help |
¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Fiscal Year 2001: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
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| Keywords | Aberrant crypt foci / rat / 1,2ーdimethylhydrazine / 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo [4,5-b] pyridine / hexosaminidase / β-catenin / LightCycler / real time relative quantitative RT-PCR / aberrant crypt foci / 定量的RT-PCR / retrovirus vector / green fluorescent protein |
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| Research Abstract |
大腸異常陰窩巣(aberrat crypt foci, ACF)は、ヒト大腸癌周囲粘膜や、発癌物質を投与した実験動物で多数発生することから、大腸癌の前癌病変と考えられている。F344雄ラットに1,2-dimethylhydrazine(DMH)および2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine(PhIP)を投与し、ACFの発生と腫瘍への進展における形態および遺伝子変異の解明を試みた。
腺管分離法により大腸陰窩を分離し、aberrant crypt(AC)の形態を正常腺管(NC)と比較した。ACは、hexosaminidase (Hex)陰性であり、分離腺管中で、NCとACの同定法を確立した。また、最大径が正常の2倍程度(120μm)の腺管を分離すれば、ほぼ100%の確率でHex(-)のACを単離可能であることを明らかにした。次に、ACからtotal RNAを抽出し、Light Cycler (Roche Diagnostics)を用いてHexαおよびβsubunit (Hexa, Hexb) mRNAの相対的発現量をreal time relative quantitative RT-PCR法(β-actinで補正)にて計測した。ACではNCに比べて、Hexa, Hexbそれぞれ0.266倍(P<0.002)および0.131倍(P<0.001)に発現量が低下しており、ACにおけるHex染色性低下とよく相関し、ACFの転写レベルでの異常が明らかとなった。また、ACFおよび腫瘍のβ-catenin遺伝子をPCR-SSCP解析したところ、ACFでは14/46例(30.4%)、腺腫では7/7例(100%)、癌では6/12例(50.0%)の変異を認めた。β-cateninの変異は、ACFの発生、進展に何らかの役割を果たすことが示唆された。
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Report
(2 results)
Research Products
(5 results)
