骨肉腫におけるメソトレキセート耐性機構の分子生物学的解析

• Project/Area Number: 12770799
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Orthopaedic surgery
• Research Institution: Tokyo Dental College (2001); Keio University (2000)
• Principal Investigator: 南雲 剛史 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (40237566)
• Project Period (FY): 2000 – 2001
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2001)
• Budget Amount: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000); Fiscal Year 2001: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000); Fiscal Year 2000: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
• Keywords: 骨肉腫 / メソトレキセート / 耐性 / Rb遺伝子 / p53遺伝子 / MTAP遺伝子 / dihydrofolate reductase / cDNA microarray / 薬剤耐性 / 葉酸代謝酵素 / 分子生物学

Research Abstract

14例の骨肉腫臨床材料を使用した。
1、Rb変異とメソトレキセート(MTX)耐性:Rb遺伝子のSouthern blot解析またはRb蛋白の免疫染色性より6例においてRb変異を認めた。これらは全て画像上も組織学的にもMTX耐性と判定され、変異が検出されなかった8例と比較し有意差を認めた。これはRb変異をもつ細胞株がMTX耐性を示したin vitroの実験結果と同様であった。
2、p53変異とMTX耐性:p53遺伝子のPCR-SSCP-direct sequence解析またはp53蛋白の免疫染色性より10例において変異を認めた。このうちMTX耐性と判定されたものは5例であり、p53変異はRb変異と異なりMTX耐性機構への関与は少ないことが示唆された。
3、Methylthioadenosine phosphorylase (MTAP)欠失とMTX耐性:今回の臨床材料においてはmultiplex PCRを用いた解析でMTAP遺伝子のホモ欠失は認めなかった。
以上より臨床において骨肉腫のMTX耐性機序としてはRb遺伝子変異が重要であり、昨年度のデータと合わせるとRb変異例でのdihydrofolate reductaseの発現増強が直接関与すると考えられた。一方、p53変異やMTAP欠失はMTX耐性への関与は少ないと思われた。
4、cDNA microarrayによるMTX耐性に関与する分子の検索:今回、in vitroではMTX耐性骨肉腫株が得られなかったため、ヌードマウス可移植株MNNG/HOSを用いてin vivoでの耐性獲得を試みている。