口腔癌におけるp300遺伝子の高感度変異解析法を用いた変異解析と癌抑制機能解析
| Project/Area Number |
12771137
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
病態科学系歯学(含放射線系歯学)
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| Research Institution | Tsurumi University |
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Principal Investigator |
大島 朋子 鶴見大学, 歯学部, 講師 (50233101)
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| Project Period (FY) |
2000 – 2001
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2001)
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| Budget Amount *help |
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2001: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
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| Keywords | p300 / 遺伝子変異 / 転写コファクター / RT-PCR |
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| Research Abstract |
(1)p300遺伝子の変異解析結果
13例の口腔扁平上皮癌細胞株を含む各種ヒト癌細胞株35例において、mRNAを抽出し、P300cDNAに特異的プライマーを設計しRT-PCR法で増幅したサンプルを用い変異を検索した。その結果2例で解析フラグメントの移動度の異なる株を検出した。これをシークエンス解析レた。1例で2ヶ所の点突然変異の結果ミスセンス変異とストップコドンを生じていた。もう1例ではin frameでの欠失変異でbromodomainを含む228アミノ酸に相当する領域を欠いていた。
(2)変異p300遺伝子の機能解析
p300遺伝子に変異を持つ上記の2例では変異遺伝子産物を発現しており、特に後者のbromodomain欠失例の遺伝子をクローニングし、機能の変化について検討した。
正常p300はTGF-β応答性に細胞周期の活性化キナーゼ阻害作用を持つP21WAF1/CIP1のプロモーターをtransactivateすることが知られている。そこで、変異p300をもつ細胞株にTGF-β受容体とともに正常p300および変異p300発現ベクターとp21WAF1/CIP1プロモーターのレポーター遺伝子をトランスフェクトした。TGF-β存在下でtrangent reporter gene assayを行った結果、正常p300の導入量依存的にプロモーター活性を上昇できたが、変異遺伝子の導入では上昇できなかった。したがって、今回検討したbromodomain欠失変異のp300は正常p300が持つ転写コファクターとしての機能を欠き、細胞周期を制御できずに癌化に向かうことが示唆された。
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Report
(2 results)
Research Products
(1 results)
