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分子生物学的手法を用いた歯周病の細菌学的診断法の開発

Research Project

Project/Area Number 12771284
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 矯正・小児・社会系歯学
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

角 義久  九州大学, 歯学部・附属病院, 助手 (60281193)

Project Period (FY) 2000 – 2001
Project Status Completed (Fiscal Year 2001)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 2001: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywords歯周病細菌 / PCR / 歯周病
Research Abstract

歯周病細菌であるActinobacillus actinomycetemcomitans、Porphyromonas gingivalis、Treponema denticolaについて既に報告されている遺伝子の特異的な塩基配列を基に、PCR法で特異的遺伝子断片を増幅するための特異プライマーを、また16SリボゾームRNAの塩基配列を基に、口腔内細菌叢を構成する全ての細菌を検出できるユニバーサルプライマを作製した。
これらのプライマーを用いて同一条件のもとで最短の反応時間でPCR産物を検出できる至適条件を検討し、各種細菌が同時に検出可能となった。
各PCR産物よりの1本鎖DNAをターゲットとする、TaqManプローブを作製した。
各歯周病細菌で様々な濃度の染色体DNAを調製し、これらをテンプレートDNAとして各歯周病細菌の特異プライマまたはユニバーサルプライマー、そして各々のTaqManプローブによる、ABIPRISMTM 7700 Systemを用いたリアルタイム検出の定量的PCR法にてPCR産物の定量解析を行い、各特異プライマーについてはその特異性を、ユニバーサルプライマーについてはその非特異性を確認した。さらに、様々な濃度の菌懸濁液を調製し、前述の方法を用いて定量解析を行い、細菌検査の定量における基準を設定しようとしている。
現在まで、予防歯科外来で様々な病型の歯周炎患者から承諾を得て、85名の唾液と121名630歯より歯垢をサンプリングし、この定量解析により菌数を推定し、検査結果と病態の変化を経時的調査しているが、本診断法の診断基準や臨床応用法を確立するには、臨床に適したサンプリングの方法や、PCR法での定量にポジティブコントロールとしてスタンダードDNAを用いるべきかを検討し、歯周病細菌とその特異プライマーの種類などについての再設定、さらには歯周病の細菌以外の発病因子への考慮などが必要である。

Report

(2 results)
  • 2001 Annual Research Report
  • 2000 Annual Research Report

URL: 

Published: 2000-04-01   Modified: 2016-04-21  

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