| Budget Amount *help |
¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Fiscal Year 2001: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
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| Research Abstract |
本研究では,アセチルコリン(ACh)受容体を介する,(1)Tリンパ球におけるインターロイキン-2(IL-2)遺伝子発現,(2)リンパ球における一酸化窒素(NO)産生について検討した.実験材料としてヒトT細胞系白血病細胞株(CEMとMOLT-3)およびB細胞系白血病細胞株Daudiを用いた.
1)ACh受容体を介するIL-2遣伝子発現機構の検討:Tリンパ球のACh受容体を刺激した後,IL-2遺伝子の発現を,reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)法により解析した.MOLT-3において,ムスカリン受容体(mAChR)刺激はIL-2遺伝子発現を減弱させた.2)リンパ球におけるNO合成酵素(NOS)遺伝子発現の検討:リンパ球におけるNOS遺伝子発現を,RT-PCR法により解析した.CEMには神経型NOS(nNOS)および誘導型NOS(iNOS)が発現しており,内皮型NOSは発現していなかった.DaudiにはいずれのNOS遺伝子とも発現していなかった.mAChR作用薬bethanecholは,CEMにおけるiNOSの遺伝子発現を増強した.この作用はmAChR拮抗薬atropineにより拮抗された.3)ACh受容体刺激のNO産生に及ぼす影響の検討:共焦点レーザー顕微鏡を用いて,NO感受性蛍光色素(DAF-2DA)を負荷したCEMにおいてACh受容体刺激した際の細胞内NO産生の変化を測定した.mAChR作用薬oxotremorine-M(Oxo-M)によるNO産生の増大は,atropineにより拮抗された.さらに,mAChRサブタイプ選択的拮抗薬を用いて関与するサブタイプを検討したところ,pirenzepne>4-DAMP>>AF-DX116の順で拮抗された.すなわち,薬理学的M1サブタイプの関与が示唆された.
以上の結果より,1)Tリンパ球のACh受容体刺激により,IL-2遺伝子発現が影響を受けること,2)Tリンパ球におけるM1サブタイプmAChRを介する細胞内NO産生が明らかとなった.Tリンパ球により合成および遊離されたアセチルコリンが,オートクライン的に,Tリンパ球機能調節に関与している可能性が示唆された.今後はBリンパ球機能に及ぽす作用を検討する予定である.
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