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FRETを用いる低分子脂溶性活性物質レセプターの動態イメージング

Research Project

Project/Area Number 12877005
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General anatomy (including Histology/Embryology)
Research InstitutionKyoto Prefectural University of Medicine

Principal Investigator

河田 光博  京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60112512)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 森田 規之  京都府立医科大学, 医学部, 講師 (50239662)
西 真弓  京都府立医科大学, 医学部, 講師 (40295639)
小澤 一史  京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (60169290)
松田 賢一  京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40315932)
井之川 仁  京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40285250)
Project Period (FY) 2000 – 2001
Project Status Completed (Fiscal Year 2001)
Budget Amount *help
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2001: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2000: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Keywordsグルココルチコイドレセプター / ミネラルコルチコイドレセプター / エストロゲンレセプター / FRET / 熱ショックタンパク / Brg / RNA pol II / ヘテロダイメライゼーション / CFP / YFP / 培養細胞 / リアルタイムイメージング / 共役因子 / 核内動態 / FRET値
Research Abstract

グルココルチコイドレセプター(GR)はデキサメサゾン、コルチコステロン、アルドステロンに対しては細胞質・核移行を生じたが、エストロゲンには反応しなかった。ミネラルコルチコイドレセプター(MR)はデキサメサゾン、コルチコステロン、アルドステロンの他に、プロゲステロンに対しても細胞質・核移行を行った。これはプロゲステロンが化学構造的にアルドステロンと近似しているからと考えられた。細胞質・核移行にどのような分子シャペロンが関るのか検索した。geldanamycinは熱ショックタンパクHSP90と結合することによって、シャペロン機能を阻害する薬物である。Cos細胞において、GRとMRはいずれもgeldanamycin投与によってリガンド投与による細胞質・核移行が阻止されたことから、HSP90がその輸送に強く関っていることが明かとなった。共焦点レーザー顕微鏡によってGRとMRは核内での分布がほぼ同じ領域に認められたため、FRET解析を行った。リガンド添加による時間経過とともにFRETの頻度が増したことから、核内でのリガンド添加によるヘテロダイメライゼーションの形成が強く示唆された。性ホルモン受容体であるエストロゲンレセプターERも同様の方法で細胞内動態を解析した。また、ER(α、β)やPRなどはリガンドがない状態でもすでに核に分布しており、リガンドが作用すると核内のリセプター分布様相が変化し、ほぼ均一に分布していたレセプターが細かい粒状の斑点状になった。ER(α、β)の斑点はRNApolymeraseIIの部位とは一致せず、クロマチンのリモデリングに関る分子であるBrgと一致していた。また、ERαとβはリガンド添加(エストラジオール)によって核内でほぼ同じ部位に存在し、両者によるFRET形成が観察されたことから、これらもヘテロダイメライゼーション化していることが示唆された。

Report

(2 results)
  • 2001 Annual Research Report
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    (15 results)

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All Publications (15 results)

  • [Publications] Ogawa H.: "Localization of nuclear coactivators p300 and steroid receptor coactivator 1 in the rat hippocampus"Brain Res.. 890. 197-202 (2001)

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  • [Publications] Nishi M.: "Dynamic changes in subcellular localization of mineralocorticoid receptor in living cells : In comparison with glucocorticoid receptor using dualcolor labeling with green fluorescent protein spectral variants"Mol. Endocrinol.. 15. 1077-1092 (2001)

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  • [Publications] Chu D.: "Cloning and characterization of LUN, a novel RING finger protein that is highly expressed in lung and specifically binds to a palindromic sequence"J. Biol. Chem.. 276. 14004-14013 (2001)

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  • [Publications] Kawata M.: "Intracellular dynamics of steroid hormone receptor"Neurosci. Res.. 40. 197-203 (2001)

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  • [Publications] Honjo H.: "Alzheimer's disease and estrogen"J. Steroid Biochem. Mol. Biol.. 76. 227-230 (2001)

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  • [Publications] Kawata M.: "Subcellular steroid/nuclear receptor dynamics"Arch. Histol. Cytol.. 64. 353-368 (2001)

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  • [Publications] Kawata M.: "Neuroplasticity, development, and steroid hormone action"CRC Press, Boca Raton. 405 (2001)

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  • [Publications] Yoshida,M. et al: "The distributions of apoptotic cells in the medial preoptic areas of male and female neonatal rats."Neurosci.Res.. 36. 1-7 (2000)

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  • [Publications] Matsushita,H. et al: "Changes in Nitric Oxide Synthase-Containing Neurons in the Brain of Thiamine-Deficient Mice."Acta Histochem.Cytochem.. 33. 67-72 (2000)

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  • [Publications] Ito,T. et al: "In vitro and in vivo immunocytochemistry for the distribution of mineralocorticoid receptor with the use of specific antibody."Neurosci.Res.. 37. 173-182 (2000)

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  • [Publications] Yang,Y. et al: "Postnatal development of NADPH-diaphorase activity in the rat : The role of nitric oxide in the ontogeny of arginine vasopression and oxytocin."Endocrine Journal. 47. 601-613 (2000)

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  • [Publications] Xie,C-X. et al: "Immunohistochemical study of nucleoporin p62 in the hippocampus and hypothalamus of the rat brain."NeuroReport. 13. 2965-2967 (2000)

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  • [Publications] Nishi,M. et al: "Trophic interactions between brain-derived neurotrophic factor and S100b on cultured serotonergic neurons."Brain Res.. 868. 113-118 (2000)

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      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Ogawa,H. et al: "Localization of nuclear coactivators p300 and steroid receptor coactivator 1 in the rat hippocampus."Brain Res.. 890. 197-202 (2001)

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      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Kawata,M. et al: "Molecular Steroidogenesis"Universal Academy Press Inc., Tokyo, Japan. 442 (2000)

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      2000 Annual Research Report

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Published: 2000-04-01   Modified: 2016-04-21  

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