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低分子量GTP結合蛋白Rhoファミリーによる膵癌細胞のMMP-1発現調節機構

Research Project

Project/Area Number 12877088
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Gastroenterology
Research InstitutionTokai University

Principal Investigator

朴沢 重成  東海大学, 医学部, 講師 (40181482)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 岡崎 勲  東海大学, 医学部, 教授 (00051649)
Project Period (FY) 2000 – 2001
Project Status Completed (Fiscal Year 2001)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2001: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Keywords膵癌細胞 / MMP-1 / 遺伝子転写 / 低分子量GTP結合蛋白 / Rac1 / AP-1 / 膵癌 / マトリックス・メタロプロテァーゼー1 / 低分子量G蛋白 / 遺伝子転写調節 / TNF-alpha / cell motility
Research Abstract

平成13年度の研究目的は、膵癌細胞においてRac1蛋白によるMMP-1遺伝子転写調節に関わる転写因子を同定することであった。
1.Rac1蛋白によって調節されるMMP-1遺伝子プロモーターのcis領域の同定
持続活性型Rac1V12プラズミドと、プロモーター領域の5'側より削るdeletion constructをヒト膵癌細胞にco-transfectionし、ルシフェラーゼアッセイを行い比較検討した。その結果、-560bpと+76bpの間の遺伝子プロモーター領域に、Rac1蛋白によって調節されるcis領域が存在することが示唆された。同領域にはAP-1予想結合部位が数カ所存在する。MMP-1の基礎転写に必須とされかつ種々の刺激による転写に重要であると報告されている最近位のAP-1結合部位にPCR法によるsite-directed mutagenesisで変異を導入した。変異プロモーターと持続活性型Rac1V12プラズミドをco-transfectionし、ルシフェラーアッセイを行ったが完全に転写活性は失われなかった。したがってRac1によるMMP-1転写活性亢進に必要なcis領域は他の部位にも存在することが示唆された。
2.ゲルシフト解析
AP-1結合領域に相当するDNA配列を含む二本鎖oligo nucleotideをプローブとして標識し、Rac1V12プラズミドおよびempty vectorを遺伝子導入したヒト膵癌細胞から分離抽出した核蛋白をゲルシフト解析した。その結果AP-1のみでなく他の転写因子がRac1蛋白によるMMP-1遺伝子転写活性の亢進に関わっていることが示唆された。
3.現在さらに詳細なプロモーター領域の検討を行っている。

Report

(2 results)
  • 2001 Annual Research Report
  • 2000 Annual Research Report

Research Products

(9 results)

All Other

All Publications (9 results)

  • [Publications] Watanabe T. et al: "Dynamic change of cells expressing MMP-2 mRNA and MT1-MMPmRNA in the recovery from liver fibrosis in the rat"J. Hepatology. 35. 465-473 (2001)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] Okazaki I.: "Molecular mechanism of the reversibility of hepatic fibrosis"J. Gastroenterol Hepatol. 15 Supp1. D26-D32 (2000)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] Watanabe T.: "Gene expression on interstitial collagenase in both progressive and recovery phase of rat liver fibrosis induced・・・"J. Hepatology. 33. 224-235 (2000)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] 朴沢 重成: "肝星細胞におけるマトリックスメタロプロテアーゼ-1 遺伝子発現"最新医学. 55(8). 58-62 (2000)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] HOZAWA,S: "Rho family GTPases regulate transcriptional induction of MMP-1 by TNF-α in human hepatic stellate cells."Gastroenterology. 118(4). A1013 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Hozawa S: "Molecular mechanisms of MMP-1 gene expression in hepatic stellate cells."In Gastroenterology and Hepatology (Millennium 2000). (in press). (2001)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Watanabe T: "Gene expression on intestinal collagenase in both progressive and recovery phase of rat liver fibrosis-・・・,"Journal of Hepatology. 33. 224-235 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] 岡崎勲: "肝線維化の分子生物学"肝臓. 44(11). 741-753 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] 朴沢重成: "肝星細胞におけるMMP-1発現の制御機構"最新医学. 55(8). 1776-1780 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report

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Published: 2000-03-31   Modified: 2016-04-21  

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