| Project/Area Number |
12877166
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Endocrinology
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| Research Institution | Meiji University |
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Principal Investigator |
加藤 幸雄 明治大学, 農学部, 教授 (30114177)
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| Project Period (FY) |
2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 2000: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
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| Keywords | 下垂体 / 転写調節因子 / ホルモン / 遺伝子発現 / CH / PRL / 組換えDNA |
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| Research Abstract |
以下の成果を得た
1)ウィスターおよびGHを生産するMtT/SからGHおよびPRL遺伝子の転写開始点上流域をクローニングし、全塩基配列の決定をおこない複数箇所の相互の変異を発見した。
2)レポーター遺伝子に分泌型アルカリフォスファターゼ遺伝子を持つ発現ベクターに、上記クローンを連結した。プロラクチン遺伝子については初期のクローンの連結はできず、より短い領域に絞って連結した。
3)発現ベクターを用いて、細胞への遺伝子導入を行った。その結果、GH遺伝子は細胞特異的な発現、すなわちGH遺伝子を発現しないCHOでは発現せず、GHを生産するGH3細胞ではレポーター遺伝子の発現を観察した。
4)一方、PRL遺伝子上流を連結したコンストラクトはCHO細胞で発現しないことは、コントロールに用いた発現ベクターとの比較から確認できたが、遺伝子導入の条件が下垂体由来細胞に合わないのか現在のところ発現を確認できず、条件の検討を行っている。
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