ｉｎ ｖｉｖｏイメージングを目指したｔｕｒｎ－ｏｎ型生理活性分子センサーの開発
| Project/Area Number |
12J02587
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| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 国内 |
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| Research Field |
Chemistry related to living body
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
林 隆宏 京都大学, 工学研究科, 特別研究員(PD)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2014)
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| Budget Amount *help |
¥3,960,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2014: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2013: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2012: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
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| Keywords | 糖蛋白質 / プロテオミクス / 蛋白質ラベル / 受容体 / 抗体マッピング / レクチン / 抗体 / 抗原 / 蛋白質ラベリング / 蛋白質間相互作用 / 蛍光イメージング / 癌マーカー / ラベル化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、ATPやグルタミン酸などの生理活性分子や細胞表層癌マーカーなどを特異的に認識し、検出・解析する手法の開発を目的としている。これら生理活性分子の急激な濃度変化や糖鎖構造の変化は癌や神経変性などをはじめとする疾患との関連性が深いことが報告されている。よって、これら生体分子を解析できる手法の開発は、病気メカニズムの解明や診断医療に極めて有用であると考えられる。
本年度は昨年度・一昨年度に引き続き、動物細胞表層の癌マーカー蛋白質を標的として、その検出・解析法を開発した。具体的には、細胞表層癌マーカー蛋白質（epidermal growth factor receptor; EGFR、human epidermal growth factor receptor 2; HER2, Notch1）に対する抗体にアシル転移触媒である4,4-dimethylaminopyridine(DMAP)を修飾し、抗原−抗体認識駆動による糖蛋白質及び癌マーカー蛋白質の選択的ラベル化法を開発した。Cys-マレイミドカップリング反応のよって抗体(anti-HER2, anti-Notch1 single-chain variable fragment; scFvやanti-EGFR Affibody molecules)にDMAP触媒を連結させ、適切なアシルドナー存在下で標的蛋白質を生きた動物細胞表層でラベル化した。このようにラベル化した膜蛋白質のダイナミックな挙動観察や分解速度解析にも成功した。また、ラベル化した膜蛋白質のラベル化アミノ酸残基を同定し、抗体のエピトープマッピングに成功した。
現在はこれらの結果をまとめてJournal of American Chemical SocietyにArticleとして投稿し、現在論文審査中である。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(3 results)
Research Products
(6 results)
