化学物質の生態リスク評価のための新たな無脊椎モデル生物の確立

• Project/Area Number: 12J09538
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 国内
• Research Field: Risk sciences of radiation/Chemicals
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 平野 将司 愛媛大学, 沿岸環境科学研究センター, 特別研究員(PD)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥3,630,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2014: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2013: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 2012: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: 環境化学物質 / 甲殻類 / 生態毒性 / エクジステロイド

Outline of Annual Research Achievements

海産甲殻類アミの脱皮ホルモン受容体（EcR）に着目し、EcRを介したシグナル伝達機構を指標として、環境化学物質のリスクを評価する生態毒性試験を確立することを目的とする。本年度は、EcR相互作用タンパク質として昨年度同定したclathrin heavy chain（CHC）について、EcRを介した転写における役割について調べた。CHCの細胞内局在を調べたところ、細胞質のみならず核内にも一部存在することを明らかにした。CHC発現プラスミドを作成後、アミEcR・USP発現プラスミドとともに昆虫細胞内で共発現させ、ルシフェラーゼ活性を測定した。その結果、CHC発現区は非発現区よりも有意に高い活性が得られ、且つCHC発現量に依存した活性の上昇が認められたことから、EcRを介した転写活性を促進させる作用をもつものと考えられた。次にCHCがアミEcRのどのアミノ酸と相互作用しているのか調べるため、部位特異的変異導入により、アミEcRのPhe563およびTrp568をアラニンに変異させたプラスミドを構築し、CHCとの共発現におけるレポーター活性を測定した。変異導入プラスミドを用いたレポーターアッセイの結果、W568Aのルシフェラーゼ活性がWTと比較し、有意に減少していたことから、Trp568がCHCとの相互作用に特に強く関与していることを明らかにした。さらに、哺乳細胞を用いたtwo-hybridアッセイを構築し、昆虫コアクチベータTaimanと同様にCHC発現群でもレポーター活性の上昇がみられたことから、転写活性化の促進および安定化に寄与するものと考えられた。このtwo-hybrid系と初年度構築したin silico系を組み合わせ、医薬品および生活関連物質（PPCPs）をスクリーニングしたところ、一部の医薬品、ビスフェノール化合物にアゴニスト・アンタゴニスト作用が認められた。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] In silico analysis of the interaction of avian aryl hydrocarbon receptors and dioxins to decipher isoform-, ligand-, and species-specific activations (2015)
  • Author(s): Hirano M, Hwang JH, Park HJ, Bak SM, Iwata H, Kim EY.
  • Journal Title: Environ Sci Technol Volume: 49 Issue: 6 Pages: 3795-3804
  • DOI: 10.1021/es505733f
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Enzymatic characterization of in vitro-expressed Baikal seal cytochrome P450 (CYP) 1A1, 1A2, and 1B1: Implication of low metabolic potential of CYP1A2 uniquely evolved in aquatic mammals (2015)
  • Author(s): Iwata H, Yamaguchi K, Takeshita Y, Kubota A, Hirakawa S, Isobe T, Hirano M, Kim EY.
  • Journal Title: Aquat Toxicol Volume: 162 Pages: 138-151
  • DOI: 10.1016/j.aquatox.2015.03.010
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] RNA-seq analysis of the mysid crustacean transcriptome following exposure to naturally occurring 1,3,7-Tribromodibenzo-p-dioxin (2014)
  • Author(s): Hirano, M., Uchida, M., Kusano, T., Arizono, A. and Iwata, H.
  • Journal Title: Organoharogen Compounds Volume: 76 Pages: 981-984
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Gene expression analysis of Mysid Crustacea (<i>Americamysis bahia</i>) exposed to Triclosan and Triclocarban using DNA microarray (2013)
  • Author(s): 内田雅也, 三浦苑子, 平野将司, 井口綾子, 山内良子, 吉津伶美, 中村浩, 鏡良弘, 草野輝彦, 古賀実, 有薗幸司
  • Journal Title: Journal of Environment and Safety Volume: 4 Issue: 3 Pages: 177-183
  • DOI: 10.11162/daikankyo.13G0702
  • NAID: 130003388135
  • ISSN: 1884-4375, 2186-3725
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Evaluation of Ecological Toxicity of Antibacterials in Mysid Crustacea (<i>Americamysis bahia</i>) (2013)
  • Author(s): 三浦苑子, 内田雅也, 平野将司, 山内良子, 吉津伶美, 草野輝彦, 古賀実, 有苗幸司
  • Journal Title: Journal of Environment and Safety Volume: 4 Issue: 3 Pages: 195-201
  • DOI: 10.11162/daikankyo.13G0701
  • NAID: 130003388134
  • ISSN: 1884-4375, 2186-3725
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Quantitative analysis of the interaction of constitutive androstane receptor with chemicals and steroid receptor coactivator 1 using surface Plasmon resonance biosensor systems : A case study of the Baikal seal (Pusa sibirica) and mouse. (2013)
  • Author(s): Dau, P.T., Sakai, H., Hirano. M., Ishibashi, H., Tanaka, Y., Kameda, K., Fujino, T., Kim, E,Y. and Iwata, H.
  • Journal Title: Toxicol. Sci. Volume: 131(1) Issue: 1 Pages: 116-127
  • DOI: 10.1093/toxsci/kfs288
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Potencies of red seabream AHR1- and AHR2-mediated transactivation by dioxins : Implication of both AHRs in dioxin toxicity. (2013)
  • Author(s): Bak, S., Iida, M., Hirano. M., Iwata, H. and Kim, E.Y.
  • Journal Title: Environ. Sci. Technol. Volume: 47(6) Issue: 6 Pages: 2877-2885
  • DOI: 10.1021/es304423w
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Homology modeling of the mysid ecdysone receptor and docking simulation with ecdysteroids. (2012)
  • Author(s): Hirano, M., Ishibashi, H., Kim, E.Y., Arizono, K. and Iwata, H.
  • Journal Title: Interdisciplinary Studies on Environmental Chemistry Vo. 6. Proceeding for International Symposium on Advanced Studies by Young Scientists, on Environmental Pollution and Ecoioxicology Pages: 13-18
  • Peer Reviewed
• [Presentation] RNA-seq analysis of the mysid crustacean transcriptome treated with naturally occurring 1,3,7-tribromodibenzo-p-dioxin (2015)
  • Author(s): M. HIRANO, M. UCHIDA, T. KUSANO, K. ARIZONO and H. IWATA
  • Organizer: 54th Society of Toxicology Annual Meeting and ToxExpo
  • Place of Presentation: San Diego, California
  • Year and Date: 2015-03-22 – 2015-03-26
• [Presentation] Functional characterization of the clathrin as a novel regulator of ecdysone receptor signaling pathway (2014)
  • Author(s): M. Hirano, K.T. Suzuki, H. Iwata
  • Organizer: 第17回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学山上会館, 東京都文京区
  • Year and Date: 2014-12-09 – 2014-12-10
• [Presentation] Effects of a naturally occurring dioxin, 1,3,7-tribromodibenzo-p-dioxin on the mysid transcriptome (2014)
  • Author(s): M. Hirano, M. Uchida, T. Kusano, K. Arizono, H. Iwata
  • Organizer: 第17回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学山上会館, 東京都文京区
  • Year and Date: 2014-12-09 – 2014-12-10
• [Presentation] ポリ塩化ビフェニル(PCB)曝露によるイヌ異物代謝酵素シトクロムP450への影響 (2014)
  • Author(s): 田村沙弥, Yoo Jean, 水川葉月, 阿草哲郎, 平野将司, 見野山桂, 田辺信介, 金恩英, 岩田久人
  • Organizer: 第17回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学山上会館, 東京都文京区
  • Year and Date: 2014-12-09 – 2014-12-10
• [Presentation] バイカルアザラシ・マウス エストロゲン受容体α・β転写活性化能の評価: 種差とE2誘導等価係数 (2014)
  • Author(s): 芳之内結加, 清水沙千子, 李鎭善, 平野将司, 阿草哲郎, 鈴木賢一, 中田晴彦, 金恩英, 岩田久人
  • Organizer: 第17回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学山上会館, 東京都文京区
  • Year and Date: 2014-12-09 – 2014-12-10
• [Presentation] バイカルアザラシ エストロゲン受容体α・β転写活性化能の評価: in vitro・in silico法によるリガンド作用機序の解明 (2014)
  • Author(s): 芳之内結加, 清水沙千子, 李鎭善, 平野将司, 阿草哲郎, 鈴木賢一, 中田晴彦, 金恩英, 岩田久人
  • Organizer: 第17回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学山上会館, 東京都文京区
  • Year and Date: 2014-12-09 – 2014-12-10
• [Presentation] RNA-SEQ ANALYSIS OF THE MYSID CRUSTACEAN TRANSCRIPTOME FOLLOWING EXPOSURE TO NATURALLY OCCURRING 1,3,7-TRIBROMODIBENZO-P-DIOXIN. (2014)
  • Author(s): M. HIRANO, M. UCHIDA, T. KUSANO, K. ARIZONO and H. IWATA
  • Organizer: The 34th International Symposium on Halogenated Persistent Organic Pollutants, Dioxin 2014 symposium
  • Place of Presentation: Madrid, Spain
  • Year and Date: 2014-08-31 – 2014-09-05
• [Presentation] Ecological factors as pressure of natural selection of AhR genotypes in avian species (2014)
  • Author(s): Hwang, J., Park, H.J., Bak, S.M., Hirano, M., Iwata, H., Park, J.Y., Park, Y.S. and Kim, E.Y.
  • Organizer: The 34th International Symposium on Halogenated Persistent Organic Pollutants, Dioxin 2014 symposium
  • Place of Presentation: Madrid, Spain
  • Year and Date: 2014-08-31 – 2014-09-05
• [Presentation] IN VITRO AND IN SILICO ASSESSMENT OF TRANSACTIVATION POTENCIES OF BAIKAL SEAL ESTROGEN RECEPTORS α AND β BY PERSISTENT ORGANIC POLLUTANTS AND BISPHENOLS. (2014)
  • Author(s): Yoshinouchi Y, Shimizu S, Lee JS, Hirano M, Agusa T, Suzuki KT, Nakata H, Kim EY, Iwata H
  • Organizer: The 34th International Symposium on Halogenated Persistent Organic Pollutants, Dioxin 2014 symposium
  • Place of Presentation: Madrid, Spain
  • Year and Date: 2014-08-31 – 2014-09-05
• [Presentation] EFFECTS OF POLYCHLORINATED BIPHENYLS ON THE EXPRESSION OF CYTOCHROME P450S IN BEAGLE DOGS. (2014)
  • Author(s): Tamura S, Yoo J, Mizukawa H, Agusa T, Hirano M, Nomiyama K, Tanabe S, Kim EY, Iwata H
  • Organizer: The 34th International Symposium on Halogenated Persistent Organic Pollutants, Dioxin 2014 symposium
  • Place of Presentation: Madrid, Spain
  • Year and Date: 2014-08-31 – 2014-09-05
• [Presentation] DDTs・ビスフェノール類によるバイカルアザラシ・マウス エストロゲン受容体転写活性化能の評価 (2014)
  • Author(s): 芳之内結加, 清水沙千子, 李鎭善, 平野将司, 阿草哲郎, 鈴木賢一, 中田晴彦, 金恩英, 岩田久人
  • Organizer: 第23回環境化学討論会
  • Place of Presentation: 京都大学百周年記念時計台記念館, 京都府京都市左京区
  • Year and Date: 2014-05-14 – 2014-05-16
• [Presentation] Identification of amino acid residues critical for ligand binding and transactivation in ecdvsone receptor (2013)
  • Author(s): M. Hirano, H. Ishibashi, E. Y. Kim, K. Arizono and H. Iwata
  • Organizer: 第16回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学
• [Presentation] ホッキョクグマのシトクロムP4501Aおよび2BによるPCBs代謝能力の評価 (2013)
  • Author(s): 古池幸, 平野将司, 鈴木賢一, Y. Jean, 阿草哲郎, T. J. Evans, K. Kannan, 岩田久人
  • Organizer: 第16回環境ホルモン学会
  • Place of Presentation: 東京大学
• [Presentation] Functional analyses of the mysid ecdysteroid receptor : DNA binding ability, ligand-induced transactivation and in silico modeling (2013)
  • Author(s): M. Hirano, H. Ishibashi, E. Y. Kim, K. Arizono and H. Iwata
  • Organizer: The 5^<th> Joint Forum of Environmental Sciences 2013
  • Place of Presentation: National Taiwan Ocean Unive rsity, Taiwan
  • Invited
• [Presentation] Homology modeling and ligand docking simulations of avian AHRs to decipher the interspecies differences in responses to dioxins (2013)
  • Author(s): M. Hirano, S. M. Bak, H. Iwata and E. Y. Kim
  • Organizer: The 33^<rd> International Symposium on Halogenated Persis tent Organic Pollutants, Dioxin 2013 symposium
  • Place of Presentation: Daegu, Korea
• [Presentation] In vitro and in silico analyses to predict the effects of environmental chemicals through the mysid ecdysteroid receptor signaling pathway (2013)
  • Author(s): M. Hirano, H. Ishibashi, E. Y. Kim, K. Arizono and H. Iwata
  • Organizer: The 33^(rd) International Symposium on Halogenated Persis tent Organic Pollutants, Dioxin 2013 symposium
  • Place of Presentation: Daegu, Korea
• [Presentation] In silico analysis of avian AHRs to decipher the molecular basis for interspecies differences in responses to dioxins (2013)
  • Author(s): M. Hirano, S. M. Bak, H. Iwata and E. Y. Kim
  • Organizer: The XIII International Congress of Toxicology 2013
  • Place of Presentation: COEX, Seoul, Korea
• [Presentation] Transcriptomic analysis of the liver of Japanese medaka (Oryzias latipes) exposed to Kanechlor-500, BDE47 or PFOS (2013)
  • Author(s): H. Ishibashi, M. Uchida, M. Hirano, J. Kobayashi, T. Komorita, H. Natamura, Y. Kagami, T. Kusano, Y. Ishibashi and K. Arizono
  • Organizer: 7th International Conference on Marine Pollution and Ecotoxicology
  • Place of Presentation: Hong Kong
• [Presentation] Functional analyses of the mysid ecdysteroid receptor : DNA binding ability, ligand-induced transactivation and in silico modeling. (2012)
  • Author(s): Hirano, M., Ishibashi, H., Kim, E.Y., Arizono, K. and Iwata, H.
  • Organizer: Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC) Asia/Pacific 2012
  • Place of Presentation: Kumamoto
  • Year and Date: 2012-09-25
• [Presentation] Toxicity of triclosan and triclocarban in mysid crustacea (Americamysis bahia). (2012)
  • Author(s): Arizono, K., Uchida, M., Hirano, M., Miura, S., Yoshidu, R., et al.
  • Organizer: 32^<nd> International Symposium on Halogenated Persistent Organic Pollutants, Dioxin 2012 symposium
  • Place of Presentation: Australia
  • Year and Date: 2012-08-28
• [Presentation] 環境化学物質による甲殻類脱皮ホルモン受容体を介した影響の評価 (2012)
  • Author(s): 平野将司, 石橋弘志, 金恩英, 有薗幸司, 岩田久人
  • Organizer: 第21回環境化学討論会
  • Place of Presentation: 松山
  • Year and Date: 2012-07-13
• [Remarks]
  • URL: http://ecotoxiwata.jp/