Project/Area Number |
13760230
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Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Research Field |
生物資源科学
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Research Institution | Toho University |
Principal Investigator |
安齊 洋次郎 東邦大学, 薬学部, 助手 (20318299)
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Project Period (FY) |
2001 – 2002
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2002)
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Budget Amount *help |
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2002: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2001: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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Keywords | alternative sigma factor / secondary metabolite / Micromonospora griseorubida / Saccharopolyspora erythraea / anti-sigma factor / conjugation / Actinomycetes |
Research Abstract |
Mycinamicin生産菌Micromonospora griseorubida A11725およびerythromycin生産菌Saccharopolyspora erythraea JCM 4748の置換型シグマ因子遺伝子破壊株取得を試みた。各菌株からPCRで増幅した約500bpの置換型シグマ因子遺伝子の部分的DNA断片にapramycin耐性遺伝子を挿入したDNA断片を接合用プラスミドpDN19に入れたpDN11725およびpDN4748を構築した。pDN19は放線菌のoriを持たないため、効率的に組換え株を取得できる。E.coli S17-1を供与菌とした接合にて、それぞれのプラスミドを導入したところM.griseorubida A11725では3株、S.erythraea JCM 4748では2株のapramycin耐性株が出現した。M.griseorubida A11725の耐性株のうち1株でmycinamicin IIの生産の減少が確認された。また、S.erythraea JCM 4748の耐性株2株にはerythromycin生産の変化は認められなかったが、うち1株にYM寒天培地およびTS寒天培地上での生育障害が認められた。 S.erythraea JCM 4748から相補遺伝子の取得を行った。上記の部分的シグマ因子遺伝子断片をもとに、シグマ因子遺伝子を含む2.8kb PstI-SphI断片をクローニングした。このシグマ因子遺伝子の上流にはanti-sigma factorをコードするORFも存在した。今後、2.8kb PstI-SphI断片を用いた相補実験やanti-sigma factor遺伝子の機能解析等を進める予定である。
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