C型肝炎ウイルスによる二本鎖RNA依存性プロテインキナーゼの阻害

• Project/Area Number: 13770073
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Pathological medical chemistry
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 松井 理 金沢医科大学, 医学部, 助手 (60288272)
• Project Period (FY): 2001 – 2002
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2002)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 2002: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 2001: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / インターフェロン / PKR / コアタンパク質

Research Abstract

昨年度、我々は組み換えタンパク質を用いたin vitroの実験により、HCVコアタンパク質がPKRを阻害する活性を示すことを見出した。本年度では、続いて、コアタンパク質の細胞内での働きを調べ、以下の結果を得た。
1.PKRを酵母で過剰発現させると、翻訳開始因子eIF2のリン酸化によりタンパク質合成が阻害されるため、酵母の生育が著しく阻害される。ここにさらにPKRの阻害タンパク質を共発現させると、PKRの効果が抑制されるため、酵母の生育が回復することが知られている。そこで、酵母内でコアタンパク質をPKRと共発現させたところ、酵母の生育が阻害されなかったことから、in vitroと同様、コアタンパク質がPKRを阻害することが強く示唆された。
2.通常、動物細胞内にわずかに発現されているPKRがeIF2をリン酸化することによって、タンパク質合成が部分的に阻害されている。ここにPKRの阻害タンパク質を発現させると、PKRの効果が抑制されるため、タンパク質合成量の増加が観察されることが知られている。そこで、コアタンパク質遺伝子を動物細胞に導入したところ、タンパク質合成量の増加が見られた。ここでタンパク質合成量はルシフェラーゼ遺伝子の発現量でモニターした。また、この時、コアタンパク質とPKRはどちらも細胞質に局在していた。
以上の結果から、NS5A、E2タンパク質などの他のHCVタンパク質と同様にコアタンパク質にもPKRを阻害する活性が新たに認められ、HCVによるPKR阻害の新たな機構が明らかになった。