| Project/Area Number |
13770926
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Obstetrics and gynecology
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
新田 愼 熊本大学, 医学部附属病院, 助手 (00332875)
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| Project Period (FY) |
2001 – 2002
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2002)
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| Budget Amount *help |
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2001: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
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| Keywords | OSE / HPV E6 / HPV E7 / hTERT / 不死化細胞 / 卵巣癌 |
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| Research Abstract |
ヒトOSEのprimary cultureを2回継代した際に、改変pLXSN, pMSCVpuro virus vectorを用いて、HPV E6、E7、E6+E7、をtransfectionし、1回継代後、同じvectorを用いて、hTERTを導入した。TRAP assayにて、これらの細胞株にtelomerase活性を有することが確認された。
これらの細胞株の増殖速度をcell proliferation assayで確認した結果、E6+E7が最も早く、平成15年1月の時点で、E6+E7は46継代、E6は33継代、E7は26継代培養されている。ImmunocytochemistryにてE6+hTERTのみcytokeratine陰性、vimentin陽性、EMA陰性で、その他の細胞株はcytokeratine陽性、vimentin陽性、EMA陰性のパターンであった。
それぞれの細胞株はepithelial patternとspindle patternが混在するpolyclonalな細胞集団であり。single clone由来の細胞株を樹立するため、リング法と限外希釈法を併用してcloningを行っている。
また、E6+E7に関して、継代に伴う染色体の安定性を確認するために、PDL 45とPDL 101で染色体分析を行っているが、ともにdiploidで変化が認められず、染色体の安定性が確認された。E6+E7のPDLは現在157であり、染色体の安定したヒトOSE由来不死化細胞株が樹立されたと考えられる。今後は、不死化細胞株に癌遺伝子、変異癌抑制遺伝子を導入し、卵巣癌発生モデルの作成を行う。
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