レトロウイルスにおける受容体非依存性感染と病原性発現機構の解明

• Project/Area Number: 13J04708
• Research Category: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 国内
• Research Field: Applied veterinary science
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 坂口 翔一 京都大学, 医学研究科, 特別研究員(DC1)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000); Fiscal Year 2015: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2014: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2013: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: ネコ白血病ウイルス / 内在性レトロウイルス / 受容体 / ネコモルビリウイルス / FeLIX / 受容体非依存性感染 / エンベロープ / ウイルス分離 / in silico / ネコ / FeLV

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、感染補助因子による受容体非依存性感染に着目し、その機構の解析を試みた。
本年度は、ネコ科動物におけるFeLIXの検出と解析を行い、イエネコをはじめ、ライオンなどの大型ネコ科動物、さらに大変貴重なヤマネコの血液を得ることができた。今後、野外におけるFeLV-Tの検出やFeLIX遺伝子の検出および機能解析の成果に期待される。
また、本研究で分離されたネコモルビリウイルス（FmoPV）の受容体は明らかになっておらず、その宿主域も不明である。そこで、様々な動物種・組織に由来する培養細胞を用い、宿主域の解析を行った。その結果、FmoPVはネコとアフリカミドリザル由来の培養細胞のみで増殖した。ネコ由来の培養細胞では、様々な組織由来の細胞で増殖し、他のモルビリウイルスで既知の受容体とは異なる分子を用いて感染することが示唆された。さらに、FmoPVの受容体解析を行うため、ミニゲノム系の作出を行った。その結果、作出したミニゲノム系において、リーダーとトレーラー領域および転写開始と終結シグナルが動作することや、N、P、L蛋白質の供給が必要なことがわかった。さらに、C蛋白質がミニゲノム系を抑制制御している可能性が示唆された。また、この受容体の体内分布を調べるため、ネコを用いたFmoPV感染実験系の作出を行った。加えて、不活化ワクチンの有効性試験も行った。その結果、FmoPVの接種により中和抗体が誘導された。これより、感染は成立し、正常な免疫応答が起こっていると考えられた。経鼻・経口接種での感染が成立したことより、ネコ同士の接触や汚染された環境を介してFmoPVの伝播が起こることが裏付けられた。
本年度の成果により、受容体非依存性感染機構について新たな知見が得られた。今後、これらの結果より、受容体非依存性感染機構を用いたウイルスに対する感染防御に役立つことが期待される。

Research Progress Status

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] In vitro host range of feline morbillivirus. (2015)
  • Author(s): Sakaguchi, S., Koide, R. and Miyazawa, T.
  • Journal Title: J. Vet. Med. Sci. Volume: 77 Pages: 1485-1487
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Rapid detection of feline morbillivirus by a reverse transcription loop-mediated isothermal amplification. (2015)
  • Author(s): Koide, R., Sakaguchi, S., Ogawa, M. and Miyazawa, T.
  • Journal Title: J. Vet. Med. Sci. Volume: 78 Pages: 105-108
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Susceptibility of domestic animals to a pseudotype virus bearing RD-114 virus envelope protein. (2015)
  • Author(s): Miyaho, R. N., Nakagawa, S., Hashimoto-Gotoh, A., Nakaya, Y., Shimode, S., Sakaguchi, S., Yoshikawa, R., Takahashi, M. U. and Miyazawa, T.
  • Journal Title: Gene Volume: 567 Pages: 189-195
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A soluble envelope protein of endogenous retrovirus (FeLIX) present in serum of domestic cats mediates infection of a pathogenic variant of feline leukemia virus. (2015)
  • Author(s): Sakaguchi, S., Shojima, T., Fukui, D. and Miyazawa, T.
  • Journal Title: Journal of General Virology Volume: 96 Issue: 3 Pages: 681-687
  • DOI: 10.1099/vir.0.071688-0
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Basic biological characterization of feline morbillivirus. (2015)
  • Author(s): Koide, R., Sakaguchi, S. and Miyazawa, T.
  • Journal Title: Journal of Veterinary Medical Science Volume: 印刷中
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Genetic diversity of feline morbilliviruses isolated in Japan. (2014)
  • Author(s): Sakaguchi, S., Nakagawa, S., Yoshikawa, R., Kuwahara, C., Hagiwara, H., Asai, K.-I., Kawakami, K., Yamamoto, Y., Ogawa, M. and Miyazawa, T.
  • Journal Title: Journal of General Virology Volume: 95 Issue: 7 Pages: 1464-1468
  • DOI: 10.1099/vir.0.065029-0
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] 尿細管間質性腎炎と関連するネコモルビリウイルス (2014)
  • Author(s): 坂口翔一、中川草、小川誠、宮沢孝幸
  • Journal Title: J-Vet Volume: 27 Pages: 74-79
• [Journal Article] ネコモルビリウイルスの発見～ウイルス性腎不全の可能性～ (2014)
  • Author(s): 宮沢孝幸、坂口翔一
  • Journal Title: NJK Volume: 156 Pages: 31-35
• [Journal Article] ネコモルビリウイルスに関するQ&A (2014)
  • Author(s): 宮沢孝幸、坂口翔一
  • Journal Title: SAC Volume: 177 Pages: 28-32
• [Journal Article] Genetic diversity of feline morbilliviruses isolated in Japan. (2014)
  • Author(s): Sakaguchi S, 他9名
  • Journal Title: Journal of General Virology Volume: (印刷中)
  • Peer Reviewed
• [Presentation] in vitro におけるネコモルビリウイルスの宿主域 (2015)
  • Author(s): 坂口翔一、小出りえ、小川誠、宮沢孝幸
  • Organizer: 第63回日本ウイルス学会
  • Place of Presentation: 福岡県福岡市
  • Year and Date: 2015-11-22
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] One-step nucleic acid detection of feline morbillivirus from clinical specimens (2015)
  • Author(s): 小出りえ、坂口翔一，宮沢孝幸
  • Organizer: 第63回日本ウイルス学会
  • Place of Presentation: 福岡県福岡市
  • Year and Date: 2015-11-22
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] ネコモルビリウイルスのミニゲノム系の作出 (2015)
  • Author(s): 坂口翔一、川端涼子、小出りえ、入江崇、宮沢孝幸
  • Organizer: 第158回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 青森県十和田市
  • Year and Date: 2015-09-07
• [Presentation] ネコモルビリウイルス感染実験系の作出と不活化ワクチンの有効性試験 (2015)
  • Author(s): 坂口翔一、小出りえ、桑原千恵子、酒井沙知、浅井健一、川上和夫、宮沢孝幸
  • Organizer: 第158回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 青森県十和田市
  • Year and Date: 2015-09-07
• [Presentation] RT-LAMP法によるネコモルビリウイルス検出法の開発 (2015)
  • Author(s): 小出りえ、坂口翔一、小川誠、宮沢孝幸
  • Organizer: 第158回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 青森県十和田市
  • Year and Date: 2015-09-07
• [Presentation] Truncated envelope protein of endogenous retrovirus in blood facilitates infection of a pathogenic exogenous retrovirus (2015)
  • Author(s): Sakaguchi, S. and Miyazawa, T.
  • Organizer: The 13th International Student Seminar
  • Place of Presentation: 京都大学（京都府京都市）
  • Year and Date: 2015-03-03 – 2015-03-07
• [Presentation] 日本でのネコモルビリウイルスの分離 (2015)
  • Author(s): 坂口翔一
  • Organizer: 第4回 Negative Strand Virus-Japan Symposium
  • Place of Presentation: 沖縄ラグナガーデンホテル（沖縄県宜野湾市）
  • Year and Date: 2015-01-19 – 2015-01-21
• [Presentation] ネコに持続感染するネコモルビリウイルスは腎不全を起こすのか？ (2014)
  • Author(s): 宮沢孝幸、坂口翔一、小川誠
  • Organizer: 第35回 動物臨床医学会
  • Place of Presentation: 大阪国際会議場（大阪府大阪市）
  • Year and Date: 2014-11-14 – 2014-11-16
• [Presentation] Serological survey and characterization of feline morbillivirus in Japan (2014)
  • Author(s): Sakaguchi S., Nakagawa S. and Miyazawa, T.
  • Organizer: International Feline Retrovirus Research Symposium & International Society for Companion Animal Infectious Disease (IFRRS & ISCAID) 2014
  • Place of Presentation: Niagara-on-the-Lake（カナダ）
  • Year and Date: 2014-10-19 – 2014-10-22
• [Presentation] 日本国内におけるネコモルビリウイルスの分離と抗体調査 (2014)
  • Author(s): 坂口翔一、中川草、吉川禄助、山本祐、小川誠、宮沢孝幸
  • Organizer: 第157回 獣医学会
  • Place of Presentation: 北海道大学（北海道札幌市）
  • Year and Date: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [Presentation] 感染性分子クローン由来サルレトロウイルス4型実験感染ニホンザルにおけるウイルスの体内動態 (2013)
  • Author(s): 坂口翔一, 他8名
  • Organizer: 日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 岐阜大学(岐阜)
  • Year and Date: 2013-09-20
• [Presentation] 感染性分子クローン由来ウイルスを用いたニホンザル血小板減少症の病態解析 (2013)
  • Author(s): 坂口翔一, 他8名
  • Organizer: 日本野生動物医学会
  • Place of Presentation: 京都大学(京都)
  • Year and Date: 2013-08-31
• [Remarks] 進化ウイルス研究領域（宮沢孝幸研究室）のホームページ
  • URL: http://paleovirology.jimdo.com/%E6%9C%80%E8%BF%91%E3%81%AE%E7%99%BA%E8%A1%A8%E8%AB%96%E6%96%87/
• [Remarks] 京都大学ウイルス研究所 進化ウイルス研究領域 宮沢孝幸研究室
  • URL: http://paleovirology.jimdo.com
• [Patent(Industrial Property Rights)] 新規ネコモルビリウイルス株、不活化ワクチン製剤、感染症予防法 (2014)
  • Inventor(s): 坂口翔一、宮沢孝幸、川上和夫、浅井健一
  • Industrial Property Rights Holder: 共立製薬株式会社
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Filing Date: 2014-04-01