発作性失調症2型モデルマウスを用いた発症機構の解明と遺伝子治療の試み

Research Project

Project/Area Number	14017032
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Review Section	Biological Sciences
Research Institution	Tokyo Medical and Dental University
Principal Investigator	三枝弘尚東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (90261205)
Project Period (FY)	2002
Project Status	Completed (Fiscal Year 2002)
Budget Amount *help	¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000) Fiscal Year 2002: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,600,000)
Keywords	Cav2.1チャネル / 発作性失調症2型 / ノックインマウス / 遺伝子治療
Research Abstract	本研究ではP/Q型Caチャネルをコードするalpha1A遺伝子の変異に起因する発作性失調症2型(以下EA2)のモデルマウスを作製し、それを用いてEA2発症機序の解明およびその遺伝子治療法の開発を目的とする。昨年度作製したEA2ノックインマウスおよび、その導入遺伝子にさらに改変を加えたマウスを用いて、導入したヒトalpha1Aの脳内における発現を検討した。その結果、導入したヒトalpha1A cDNAの発現量はこの2種類のマウスで10倍程度異なることが判明した。現在、これらのマウスの行動学的解析を現在すすめており、EA2モデルとしての評価を行っている。その一方で、遺伝子治療の一つの方法としてRNA/DNAキメラオリゴヌクレオチド(以下RDOと略)の利用を試みた。現在までに種々の細胞種でいろいろな遺伝子にRDOにより点変異を導入できることが知られているが、神経系細胞でもこの手法が適用できるかは明確ではない。そこで予備的な実験としてマウスの自然発生突然変異系統leaner(laと略、マウスalpha1A遺伝子の中のあるスプライスドナー部分に点変異をもち、alpha1A遺伝子のノックアウトマウスに似た症状を示す)の小脳にポリエチレンイミンを用いてRDOを導入することを試みた。その結果、通常なら3-4週齢で死亡してしまうlaホモ接合体の中に数カ月以上生き延びる個体が観察され、RDOによる遺伝子治療が有効である可能性が示唆された。現在初代培養マウス小脳顆粒細胞にRDOを導入し、実際に遺伝子修復が起きているのか、および、もしそうならどれくらいの頻度でおこるものかをRT-PCRやgenomic DNAに対するPCRにより検討している。