活性化変異c-Kit、Flt3の異常シグナル伝達を標的とした治療法の開発

• Project/Area Number: 14030050
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 水木 満佐央 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80283761)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 松村 到 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (00294083) ; 金倉 譲 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20177489)
• Project Period (FY): 2002
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2002)
• Budget Amount: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000); Fiscal Year 2002: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
• Keywords: receptor tyrosine kinase / targeting therapy / acute myeloid leukemia / mutation / chemotaxis / STAT

Research Abstract

1.Kit, Flt3シグナル伝達に関与する細胞内ドメインチロシン残基の検討:細胞質内各Tyr残基のPheに置換にて野生型c-Kitにおいては増殖・生存は影響を受けなかったがTyr567,569,719のPhe置換にて細胞遊走が著明に阻害された。Tyr567からsrc family kinase, p38MAP kinaseの活性化,Ca2+ influx, Erk1/2の活性化に到るシグナル及びTyr719からPI3-Kinaseの活性化、Ca2+influxの誘導に到るシグナルの両経路が協調しながら細胞遊走をもたらしていることを明らかにし、SCF/c-Kitを介した腫瘍浸潤へのこれらのシグナルの関与が考慮された。一方、Tyr719/PI3-Kinaseはc-Kitキナーゼ変異型でのキナーゼ活性に重要である知見を得ていたが、Flt3キナーゼ領域変異型では同領域のtyr残基およびPI3-Kinaseの会合ともキナーゼ活性に関連しないことを新たに見い出した。
2.活性化変異c-Kitレセプター特異的阻害療法の開発:STI571,AG1296,SU5614などのチロシンキナーゼ阻害剤が膜直下型変異c-Kitには有効であるが、キナーゼ領域型には単独、併用にても全く無効で、PP1のみが部分的に有効であることを見い出した。
3.活性化変異c-Kit, Flt3特異的標的遺伝子の解析:Flt3-ITDを用いたmicrochip解析にて特異的発現が認められたSTAT3/5の標的遺伝子の発現が、c-Kit変異型においても認められ、活性化変異レセプターチロシンキナーゼの腫瘍性シグナルがSTAT3/5を共通としていることを見い出した。またその標的遺伝子の一つであるpim-2はAML症例において高発現しており今後の分子標的の対象と考えられた。

Research Products

• [Publications] 上田周二: "Critical roles of c-kit tyrosine residues 567 and 719 in stem cell cell factor-induced chemotaxis : contribution of src family kinase and PI3-kinase on calcium mobilization and cell migration"Blood. 99. 3342-3349 (2002)
• [Publications] 田中弘和: "E2F-1 and c-Myc potentiate apoptosis through inhibition NF-κB that facilitates MnSOD-mediated ROS elimination"Molecular Cell. 9. 1017-1029 (2002)
• [Publications] 園山順子: "Functional cooperation among Ras, STAT5 and PI3-K is required for full oncogenic activities of BCR/ABL in K562 cells"J. Biol. Chem. 277. 8076-8082 (2002)
• [Publications] 上田 周二: "Constitutive activation of c-kit by the juxtamembrane but not the catalytic domain mutations is inibited selectively by tyrosine kinase inhibitors STI571 and AG1296"Int. J. Hematol. 76. 427-435 (2002)
• [Publications] 橋本光司: "Necessity of tyrosine 719 and phosphatidylinositol 3'-kinase-mediated signal pathway in constitutive activation and oncogenic potential of c-kit receptor tyrosine kinase with the D814V mutation"Blood. 101. 1094-1102 (2003)
• [Publications] 水木満佐央: "Suppression of myeloid transcription factors and induction of STAT response genes by AML-specific Flt3 mutations"Blood. (印刷中). (2003)