慢性C型肝炎における細胞障害性T細胞誘導不全機序の解析

• Project/Area Number: 14770244
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Gastroenterology
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 小室 理 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (40343537)
• Project Period (FY): 2002 – 2003
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2003)
• Budget Amount: ¥2,700,000 (Direct Cost: ¥2,700,000); Fiscal Year 2003: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000); Fiscal Year 2002: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
• Keywords: CHC / CTL / 細胞周期 / 慢性C型肝炎 / 樹状細胞

Research Abstract

§CHC症例のCD8細胞におけるHCV感染動態と細胞周期制御分子の発現
1、CD8細胞におけるHCV感染動態
CHCの末梢血CD8細胞よりRNAを抽出、HCVプラス鎖、マイナス鎖特異的プライマーを用いたPCRによりHCV感染動態を解析したところ、80%の症例でHCVの存在を認めた。
2、HCV陽性CD8細胞の細胞周期動態
HCV陽性CD8細胞をHCVペプチドパルスDCで刺激し細胞周期動態をDNA結合蛍光色素を用いFACSによるプロイデイパターン解析により評価したところ多くがS期にあった。
3、HCV陽性CD8陽性T細胞における細胞周期制御分子の発現
HCV陽性CD8細胞かちRNAを抽出、サイクリンD1-3、CDK4/6、サイクリンE、CDK2、サイクリンAの正の制御因子、CDK4インヒビターのP15、16、18、19、Cip/Kipインヒビターファミリーのp21、p27、p57の遺伝子発現動態を検討したところ、CDK2、サイクリンAの発現が見られたが、HCV陰性CD8細胞でも同様の発現がみられた。
4、HCV遺伝子導入T細胞における細胞周期制御分子の発現
樹立化ヒトCD8細胞株にHCVコア、NS5AタンパクcDNAを組込んだpcEF39neo プラスミドを用いHCVコア、NS5Aタンパク遺伝子を導入、HCVペプチドパルスDCで刺激した際の細胞周期制御分子の遺伝子発現量を測定したが、細胞周期制御分子の遺伝子発現量はコントロールプラスミドを導入したクローンと比較して変化が見られなかった。
以上より、CHCのCD8陽性細胞にはHCV感染が認められるものの、その細胞周期制御分子の発現は非感染細胞と差異がなく、CTL誘導不全の原因とは考えにくいと思われた。
なお本研究に用いた検体採取に際しては、患者に説明し本人の承諾を得て実施した。