DNA修復酵素を用いた突然変異特異的クローニング法の確立

• Project/Area Number: 15012243
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Kitasato University
• Principal Investigator: 塚本 俊彦 北里大学, 薬学部, 助教授 (10236862)
• Project Period (FY): 2003
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2003)
• Budget Amount: ¥6,700,000 (Direct Cost: ¥6,700,000); Fiscal Year 2003: ¥6,700,000 (Direct Cost: ¥6,700,000)
• Keywords: 大腸癌 / 突然変異 / RNA editing

Research Abstract

1)Microsatellite Instability(MSI)陽性大腸癌の突然変異特異的クローニング法による解析
Microsatellite instability陽性大腸癌のうち、40%以上のmicrosatelliteでinstabilityのある病変(MSI-H)よりstrand-switch法を用いてcDNA libraryを作成し,隣接する正常組織より同様にcDNA libraryを作成した.これらをハイブリダイズさせ、大腸菌MutS組換えタンパク質とこれに対する抗体を用いてpull downした.Pull downしたDNAをvectorにligationし、Tumor/NormalとコントロールとしてNormal/Normalのプローブを作成し、differential hybridizationによりスクリーニングを行い、陽性クローンを解析した.
その結果,CEA遺伝子,LgalS3遺伝子,CCNI遺伝子の塩基配列の置換を検出するとともに,あらたな,Natural antisense遺伝子を検出することができた.
これは,RNA editingによる塩基置換によるものと推定され,現在もとのサンプルからのgenomic DNAとcDNAの両方の解析をすすめている.