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プロテアソームS5aサブユニットによるポリユビキチン鎖認識の立体構造学的研究

Research Project

Project/Area Number 15032248
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionYokohama City University

Principal Investigator

杤尾 豪人  横浜市立大学, 大学院・総合理学研究科, 助手 (70336593)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 白川 昌宏  京都大学, 大学院・工学研究科, 教授 (00202119)
Project Period (FY) 2003 – 2004
Project Status Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help
¥4,300,000 (Direct Cost: ¥4,300,000)
Fiscal Year 2004: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2003: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Keywords蛋白質分解 / ユビキチン / プロテアソーム / NMR / ユビキチン結合モチーフ
Research Abstract

プロテアソームにより認識・分解されるためのシグナルとなるポリユビキチン鎖はユビキチンのLys48とCOOH末端によるイソペプチド結合を介してポリ化する。これとは別に、機能は不明瞭であるがLys63を介するポリユビキチン化も知られている。我々は、ユビキチン化酵素群(E1、E2)を使ったin vitro酵素反応により、Lys48リンク及びLys63リンクのジユビキチン及びテトラユビキチンを調製し、NMR、ESR、X線小角散乱法によってその立体構造を解析し、これらポリ化様式の違いによる立体構造の差異を明らかにした。これらの結果をまとめて論文を発表した。
ユビキチンは様々准分子と相互作用、複合体形成を行なうことにより、多用な生物学的機能を発揮することが知られているが、その分子認識の鍵となるのは、種々のユビキチン結合モチーフである。これらは、現在までに数種類が知られているが、我々はそのうちの一つ、UBA (ubiquitin associated)ドメインとユビキチンの複合体の立体構造を溶液NMR法によって決定し、分子認識機構を原子分解能で解明した。これはユビキチン-UBA複合体の最初の構造決定である。この結果については、Structure誌に発表した。
また、2003年にユビキチン結合モチーフであると示唆されたVHSドメインについてもユビキチンとの結合様式を原子分解能で調べるべく研究を開始した。STAM2蛋白質のVHSドメインの試料調製を行ない、NMRを使ってユビキチンとの相互作用実験を行なった。データの解析の結果、VHSの中の、どのアミノ酸残基がユビキチンと結合するかを明らかにした。

Report

(2 results)
  • 2004 Annual Research Report
  • 2003 Annual Research Report
  • Research Products

    (7 results)

All 2005 2004 Other

All Journal Article (5 results) Publications (2 results)

  • [Journal Article] Structure of the UBA Domain of DsK2p in Complex with Ubiquitin : Molecular Determinants for Ubiquitin Recognition.2005

    • Author(s)
      Ohno, A., Jee J.G., Fujiwara, K., Tenno, T., Goda, N., Tochio, H., Kobayashi, H., Hiroaki, H., Shirakawa, M.
    • Journal Title

      Structure (印刷中)

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Intracellular Phosphate serves as a signal for the regulation of the PHO pathway in Saccharomyces cerevisiae.2004

    • Author(s)
      Auesukaree C, Homma T, Tochio H, Shirakawa M, Kaneko Y, Harashima S.
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 279,17

      Pages: 17289-17294

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Structure of the ubiquitin-interacting motif of S5a bound to the ubiquitin-like domain of HR23B.2004

    • Author(s)
      Fujiwara K, Tenno T, Sugasawa K, Jee JG, Ohki I, Kojima C, Tochio H, Hiroaki H, Hanaoka F, Shirakawa M.
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry 279,6

      Pages: 4760-4767

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] Structural basis for distinct roles of Lys63- and Lys48-linked polyubiquitin chains.2004

    • Author(s)
      Tenno, T., Fujiwara, K., Tochio, H., Iwai, K., Morita, E.H., Hayashi, H., Murata, S., Hiroaki, H., Sato, M., Tanaka, K., Shirakawa, M.
    • Journal Title

      Genes to Cells 9

      Pages: 865-875

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Journal Article] High-throughput construction method of expression vector of peptides for NMR study suited for isotopic labeling.2004

    • Author(s)
      Tenno, T., Goda, N., Tateishi, Y., Tochi, H., Mishima, M., Hayashi, H., Shirakawa, M., Hiroaki, H.
    • Journal Title

      Protein Eng Des Se1 17

      Pages: 305-314

    • Related Report
      2004 Annual Research Report
  • [Publications] Auesukaree C, Homma T, Tochio H, Shirakawa M, Kaneko Y, Harashima S.: "Intracellular phosphate serves as a signal for the regulation of the PHO pathway in Saccharomyces cerevisiae."Journal of Biological Chemistry. 279,17. 17289-17294 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report
  • [Publications] Fujiwara K, Tenno T, Sugasawa K, Jee JG, Ohki I, Kojima C, Tochio H, Hiroaki H, Hanaoka F, Shirakawa M.: "Structure of the ubiquitin-interacting motif of S5a bound to the ubiquitin-like domain of HR23B."Journal of Biological Chemistry. 279,6. 4760-4767 (2004)

    • Related Report
      2003 Annual Research Report

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Published: 2003-04-01   Modified: 2018-03-28  

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