発達障害におけるCRHおよびRho蛋白GTPasesに関する分子形態学的研究

• Project/Area Number: 15659244
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Pediatrics
• Research Institution: Shiga University of Medical Science
• Principal Investigator: 竹内 義博 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (80188169)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高野 知行 滋賀医科大学, 医学部, 講師 (80236249)
• Project Period (FY): 2003 – 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000); Fiscal Year 2004: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2003: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
• Keywords: CRH / Rho蛋白 / GTPases / Rhoファミリー / TRH / 年齢依存性てんかん / 発達障害

Research Abstract

日齢14、28のマウスにpentobarbital (50mg/kg)を腹腔内投与しで麻酔をかけ、4% paraformaldehydeにて潅流固定を行い脳を取り出した後固定、クリオスタットにて脳前額断連続凍結切片を作製した。この凍結浮遊切片に対し、抗CRH抗体を用いて免疫組織化学を行い、15年度と同様にCRH陽性構造脳前額断連続標本を作製した。
CRHの強い発現がみられた部位はparaventricular nuclei, inferior olivary nucleiであり、中等度の発現はmedical geniculate nucleus, central nucleus of the amygdala, bed nucleus of the striaterminalis, lateral dorsal tegmental nucleus, lateral parabrachial nucleus, nucleus of prepositus hypogrossusに認められた。この結果は日齢56のマウスとほぼ同様であり、明らかな発達的変化は観察されなかった。
次に日齢56のマウスにpentobarbital (50mg/kg)を腹腔内投与して麻酔をかけ、4% paraformaldehydeにて潅流固定を行い脳を取り出した後固定、クリオスタットにて脳前額断連続凍結切片を作製、この凍結浮遊切片を用いて辺縁系を中心に、Rho蛋白GTPases (Rac, Cdc42, RhoA)の局在の組織学的検出を試みたが、各抗体の感受性がのためか、Rho蛋白GTpases (Rac, Cdc42, RhoA)の局在は確認出来なかった。
今後、固定法や抗体を代えて組織化学的手法を検討し、日齢14、28のマウスについて発達的変化を観察する予定である。