異種移植におけるブタレトロウイルス制御の試み

Research Project

Project/Area Number	15659295
Research Category	Grant-in-Aid for Exploratory Research
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	General surgery
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	宮川周士大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (90273648)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	宮澤孝幸 (宮沢孝幸) 帯広畜産大学, 畜産学部, 助教授 (80282705) 福田大輔株式会社ニプロ, 総合研究所, 研究員
Project Period (FY)	2003 – 2004
Project Status	Completed (Fiscal Year 2004)
Budget Amount *help	¥3,300,000 (Direct Cost: ¥3,300,000) Fiscal Year 2004: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000) Fiscal Year 2003: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Keywords	PERV / シュードタイプアッセイ法 / ブタ血管内皮細胞 / siRNA / H1 promoter / 糖転移酵素 / 遺伝子導入 / env蛋白
Research Abstract	<PERVの制御法の検討> 1.各種糖鎖プロセシング阻害薬を用い、PERV表面のN結合型糖蛋白の高マンノース型糖鎖がヒト細胞への感染に関与することを証明した。 2.次に、PERV-Bを強発現させた、独立した3系統のブタ血管内皮細胞(PEC)に、N結合型糖鎖のプロセシングに関わるα-mannosidase lb (Man lb)とN-Acetylglucosaminyltransferase l (GnT-l)およびmockを遺伝子導入した。これらの細胞由来のPERVを293細胞へ感染させ、感染細胞数の変化をnls-Lac(Z)pseudotype assayにて検討した。Manlb群の感染細胞数は、mock群に比して、それぞれ#1:33%,#2:30%,#3:29%と低下していた。Gnt-l群でも、#1:25%,#2:44%,#3:18%と低下していた。 <siRNAによるPERVの制御> pBlueにpCX/GFPとpSUPER (H1 promoter)を組み込んだcassette vector : pSXGHを作成し、これにgag領域に対するsiRNAを組み込んだ(pSXGH-siRNA)。PERV-Bを強発現させたブタ血管内皮細胞(PEC)にこのvectorを遺伝子導入し、transient cell lineと、さらに数個のstable cloneを樹立した。これらの細胞由来のPERVをヒト胎児腎(HEK293)細胞へ感染させ、感染細胞数の変化をnls-Lac(Z) pseudotype assayにて検討した。1.Mockにたいして、iRNA群(transient cell line)では#1:36%,#2:39%と有意に低下していた。2.Cloneでは、mock cloneに対し#5:26%,#6:14%,#12:15%と低下していた。