| Project/Area Number |
15H00443
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
生物学Ⅱ(動物)
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
坂本 亘 熊本大学, 生命資源研究支援センター, 技術専門職員
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| Project Period (FY) |
2015
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2015)
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| Budget Amount *help |
¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2015: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
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| Keywords | 遺伝子改変マウス / 精子 / 室温保存 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、セルロースベースのカードを使った乾燥血液やDNAサンプルの輸送や室温保存が可能となり、サンプル作製の作業効率化や輸送や保存コストの削減に大きく寄与している。これをマウス精子に応用できれば、高額な機器を必要とせずサンプル作製が可能となるだけでなく、厳密な輸送温度管理や専用容器を必要としない為、普通郵便を使って遺伝子改変マウスの授受が可能となる。そこで、マイクロチューブおよび紙媒体上にて自然乾燥したマウス精子の発生能を調べるため、C57BL/6Jマウス精子をマウス精子の凍結乾燥に用いられるTE緩衝液に懸濁し、マイクロチューブ(MT区)及びセルロース紙上(CP区)で自然乾燥した後、卵細胞質内精子注入法(ICSI)により受精卵を作製し体外培養を行った。同系統の凍結融解精子を注入した区をコントロールとした(CT区)。その結果、注入した卵子の生存率は、CT区55.4%(30/54)、MT区65.6%(21/32)、CP区50.0%(14/28)となり、受精率はCT区90.0%(27/30)、MT区81.0(17/21)、CP区85.7%(12/14)であった。2細胞期および胚盤胞期への発生率はそれぞれ、CT区83.3%(25/30)および40.0%(12/30)、MT区33.3%(7/21)および4.8%(1/21)、CP区28.6%(4/14)および0.0%(0/14)であった。次に乾燥精子のDNA損傷を調べるため、コメットアッセイを行った結果、MT区及びCP区において、CT区と比較して明らかに長い彗星状のComet Tailパターンを示した。
マイクロチューブおよびセルロース紙上で自然乾燥したC57BL/6Jマウス精子を用いて1CSIを行った結果、生存率はコントロールと変わらないものの、受精率はやや低値を示し、保存媒体に係らず、2細胞期への発生率は低く、殆ど胚盤胞期まで発生しなかった。またコメットアッセイの結果、核DNAに損傷を受けていることが分かった。
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