16SrRNA解析を用いた細菌同定

• Project/Area Number: 15H00624
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 臨床医学
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 竹森 優喜子 金沢大学, 附属病院, 臨床検査技師
• Project Period (FY): 2015
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000); Fiscal Year 2015: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
• Keywords: 16SrRNA解析 / Sphingomonas paucimobilis / カタラーゼ陰性黄色ブドウ球菌

Outline of Annual Research Achievements

1. 研究目的
多くの微生物検査室では、コロニー性状、栄養要求性、生化学的性状により細菌を同定する。しかし、日常検査では変異株や稀な菌などの同定困難な菌に遭遇することが珍しくない。本研究では、①16S rRNA解析を行い、同定困難であった細菌を同定すること、②解析株の表現型および菌株出現の臨床背景を検討することを目的とする。
2. 研究方法
日常検査において同定困難であった株を対象とした。16S rRNA解析は大楠らの方法に従い、菌株のDNA抽出(煮沸法)⇒16S rRNA領域の増幅(PCR法)⇒増幅産物の精製⇒シーケンス反応⇒DNA配列の解読⇒相同性検索(BLAST, BlBl, EzTaxon-e)により行なった。表現型はコロニー性状、生化学的性状を中心に観察した。菌株の出現背景は診療録を参照した。
3. 主な研究成果
(1) 16S rRNA解析結果 : Sphingomonas paucimobilis
オキシダーゼ弱陽性、黄色色素産生、DNase陽性のグラム陰性桿菌。特に黄色色素産生が特徴的であった。NF18(ニッスイ)で同定可能であった。Walk away (ベックマン・コールター)では同定確率50%で本菌種と同定された。S. paucimobillusの病原性は低く日和見感染症の起因菌とされている。本症例は免疫抑制の患者で、分離材料より起因菌と推測され貴重な症例と思われた。
(2) 16SrRNA解析結果 : Staphylococcus aureus
本菌は免疫抑制状態である患者の口腔由来検体より検出された。カタラーゼ陰性のグラム陽性球菌で、コロニーはS. aureus様で、PSラテックス栄研、LV反応陽性であった。Walk away (ベックマン・コールター)では99.9%の確率でS. aureusと同定された。以上より、カタラーゼ陰性のS. aureusと同定された。Staphylococcus属は通常カタラーゼ陽性であり、検査ではカタラーゼ陰性株の存在を考慮すべきと思われた。